请教酶消化法培养脐带间充质干细胞的问题

yingjie

这个说不定的，根据你胰酶和胶原酶浓度和消化时间不应该是消化过度的问题，如果你的消化酶没什么问题的话，就查查你的培养基有没有问题，用的是DMEM/F12培养基吗?还有你培养基中加了些什么,一般10%FBS,双抗100单位/ml,谷氨酰胺1%,还有碳酸氢钠.也不知道你是怎么操作的,很难说,能说下你的做细胞过程吗

yingjie

回复 细胞干 的帖子1 A" w& \' _3 s. u  b1 J

  V7 L; f4 I* r4 ?* h: C, Z 大部分都差不多，就是在消化上有点不同，这是我的做法
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# m% d, h+ d1 E- ]( [3 t( p6 w, \7 aWharton胶组织用剪刀剪成1mm3的碎块于是先准备好的装有0.1%胶原酶的
* D  T  J; B. q  w! \2 B" o: v0 @小烧杯中，置于37度恒温培养箱中消化4-6h
8 m% b& ^" z; {! f    加入适当体积的PBSA（PBS缓冲液中加入牛血清白蛋白，即BSA），一般是
( \4 O$ w+ P2 w7 E- o% J- y% H胶原酶溶液体积的2倍，250g离心5分钟。
. I8 e# {4 x2 z    弃上清液，加入2.5%胰蛋白酶（大约是沉淀物体积的2倍），37度处理30
, g& E  Q8 Y$ s0 p3 T分钟，轻轻摇动。
4 _/ _1 U) ^5 i7 o    加入适当体积的FBS（消化酶体积的10%）中止消化。
) A5 P# `: [* F    1200r/min离心5分钟,弃上清,用PBS清洗2次.! w5 V) c/ q/ D5 c$ x* A! S  @+ E" X. l
    用培养液重悬分离得到的细胞,用滴管吸取细胞悬液于培养瓶中,摇匀.取少) ~  H. J; g- c# H6 |
许于细胞计数板,生物显微镜下观察计数,加入培养液,调整细胞悬液浓度大约在
) q8 x2 Q# S# a, p4 \; H! x, y1*10 6/ml.置于37度,5%CO2的饱和湿度培养箱中培养.
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     我想，你在消化上应该在胶原酶消化完了之后最好先终止消化离心，再加入胰酶消化，还有就是消化完组织后，要清洗细胞，这个很重要，把残留的胰酶清洗掉
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