干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

 

 

搜索
中源协和

免疫细胞治疗专区

欢迎关注干细胞微信公众号

  
查看: 51728|回复: 1
go

请教酶消化法培养脐带间充质干细胞的问题   [复制链接]

Rank: 2

积分
221 
威望
221  
包包
619  

优秀会员

楼主
发表于 2012-3-20 10:05 |显示全部帖子
这个说不定的,根据你胰酶和胶原酶浓度和消化时间不应该是消化过度的问题,如果你的消化酶没什么问题的话,就查查你的培养基有没有问题,用的是DMEM/F12培养基吗?还有你培养基中加了些什么,一般10%FBS,双抗100单位/ml,谷氨酰胺1%,还有碳酸氢钠.也不知道你是怎么操作的,很难说,能说下你的做细胞过程吗
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 6 + 15 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 6  包包 + 15   查看全部评分

Rank: 2

积分
221 
威望
221  
包包
619  

优秀会员

沙发
发表于 2012-3-21 09:29 |显示全部帖子
回复 细胞干 的帖子: R9 d; P6 V5 H+ h  u; i! L$ B
: i4 U$ O- l0 ]$ i: d
大部分都差不多,就是在消化上有点不同,这是我的做法
1 w! O* J5 `! {' x
' m# r- p6 C& E2 J: N5 T; sWharton胶组织用剪刀剪成1mm3的碎块于是先准备好的装有0.1%胶原酶的
2 @0 O; R1 V+ p) G小烧杯中,置于37度恒温培养箱中消化4-6h
9 B# c! V7 q% P: v: {) _6 L    加入适当体积的PBSA(PBS缓冲液中加入牛血清白蛋白,即BSA),一般是1 i2 }* d% N) K
胶原酶溶液体积的2倍,250g离心5分钟。
" u. B% `; K+ F- ~0 D    弃上清液,加入2.5%胰蛋白酶(大约是沉淀物体积的2倍),37度处理302 k' f; l3 e; u
分钟,轻轻摇动。/ U9 ~) [! R6 i# b( j4 g- W
    加入适当体积的FBS(消化酶体积的10%)中止消化。
' f6 k, S/ U1 K" a- i! y4 B    1200r/min离心5分钟,弃上清,用PBS清洗2次./ B8 \; l7 z6 b$ t0 l
    用培养液重悬分离得到的细胞,用滴管吸取细胞悬液于培养瓶中,摇匀.取少
9 f% ~9 v2 [6 n" j: L/ m# `许于细胞计数板,生物显微镜下观察计数,加入培养液,调整细胞悬液浓度大约在( P$ e3 I- S  H% ~$ f
1*10 6/ml.置于37度,5%CO2的饱和湿度培养箱中培养.( A2 I+ p, s2 O4 q/ R+ H, V4 f

2 ^1 @* |* z+ X8 f& m! p     我想,你在消化上应该在胶原酶消化完了之后最好先终止消化离心,再加入胰酶消化,还有就是消化完组织后,要清洗细胞,这个很重要,把残留的胰酶清洗掉
  n( d+ I2 J% i- M
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 20 + 40 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 20  包包 + 40   查看全部评分

‹ 上一主题|下一主题
你需要登录后才可以回帖 登录 | 注册
验证问答 换一个

Archiver|干细胞之家 ( 吉ICP备2021004615号-3 )

GMT+8, 2025-12-18 07:26

Powered by Discuz! X1.5

© 2001-2010 Comsenz Inc.