请教酶消化法培养脐带间充质干细胞的问题

yingjie

这个说不定的，根据你胰酶和胶原酶浓度和消化时间不应该是消化过度的问题，如果你的消化酶没什么问题的话，就查查你的培养基有没有问题，用的是DMEM/F12培养基吗?还有你培养基中加了些什么,一般10%FBS,双抗100单位/ml,谷氨酰胺1%,还有碳酸氢钠.也不知道你是怎么操作的,很难说,能说下你的做细胞过程吗

yingjie

回复 细胞干 的帖子: R9 d; P6 V5 H+ h  u; i! L$ B
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大部分都差不多，就是在消化上有点不同，这是我的做法
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' m# r- p6 C& E2 J: N5 T; sWharton胶组织用剪刀剪成1mm3的碎块于是先准备好的装有0.1%胶原酶的
2 @0 O; R1 V+ p) G小烧杯中，置于37度恒温培养箱中消化4-6h
9 B# c! V7 q% P: v: {) _6 L    加入适当体积的PBSA（PBS缓冲液中加入牛血清白蛋白，即BSA），一般是1 i2 }* d% N) K
胶原酶溶液体积的2倍，250g离心5分钟。
" u. B% `; K+ F- ~0 D    弃上清液，加入2.5%胰蛋白酶（大约是沉淀物体积的2倍），37度处理302 k' f; l3 e; u
分钟，轻轻摇动。/ U9 ~) [! R6 i# b( j4 g- W
    加入适当体积的FBS（消化酶体积的10%）中止消化。
' f6 k, S/ U1 K" a- i! y4 B    1200r/min离心5分钟,弃上清,用PBS清洗2次./ B8 \; l7 z6 b$ t0 l
    用培养液重悬分离得到的细胞,用滴管吸取细胞悬液于培养瓶中,摇匀.取少
9 f% ~9 v2 [6 n" j: L/ m# `许于细胞计数板,生物显微镜下观察计数,加入培养液,调整细胞悬液浓度大约在( P$ e3 I- S  H% ~$ f
1*10 6/ml.置于37度,5%CO2的饱和湿度培养箱中培养.( A2 I+ p, s2 O4 q/ R+ H, V4 f

2 ^1 @* |* z+ X8 f& m! p     我想，你在消化上应该在胶原酶消化完了之后最好先终止消化离心，再加入胰酶消化，还有就是消化完组织后，要清洗细胞，这个很重要，把残留的胰酶清洗掉
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