|

- 积分
- 221
- 威望
- 221
- 包包
- 619
|
回复 细胞干 的帖子1 A" w& \' _3 s. u b1 J
V7 L; f4 I* r4 ?* h: C, Z 大部分都差不多,就是在消化上有点不同,这是我的做法
$ X2 [+ y9 b2 }! S
# m% d, h+ d1 E- ]( [3 t( p6 w, \7 aWharton胶组织用剪刀剪成1mm3的碎块于是先准备好的装有0.1%胶原酶的
* D T J; B. q w! \2 B" o: v0 @小烧杯中,置于37度恒温培养箱中消化4-6h
8 m% b& ^" z; {! f 加入适当体积的PBSA(PBS缓冲液中加入牛血清白蛋白,即BSA),一般是
( \4 O$ w+ P2 w7 E- o% J- y% H胶原酶溶液体积的2倍,250g离心5分钟。
. I8 e# {4 x2 z 弃上清液,加入2.5%胰蛋白酶(大约是沉淀物体积的2倍),37度处理30
, g& E Q8 Y$ s0 p3 T分钟,轻轻摇动。
4 _/ _1 U) ^5 i7 o 加入适当体积的FBS(消化酶体积的10%)中止消化。
) A5 P# `: [* F 1200r/min离心5分钟,弃上清,用PBS清洗2次.! w5 V) c/ q/ D5 c$ x* A! S @+ E" X. l
用培养液重悬分离得到的细胞,用滴管吸取细胞悬液于培养瓶中,摇匀.取少) ~ H. J; g- c# H6 |
许于细胞计数板,生物显微镜下观察计数,加入培养液,调整细胞悬液浓度大约在
) q8 x2 Q# S# a, p4 \; H! x, y1*10 6/ml.置于37度,5%CO2的饱和湿度培养箱中培养.
+ s; A. e2 | _$ A! P$ D' r& {3 e. w; P- Q2 D8 I/ X# `4 Z9 {
我想,你在消化上应该在胶原酶消化完了之后最好先终止消化离心,再加入胰酶消化,还有就是消化完组织后,要清洗细胞,这个很重要,把残留的胰酶清洗掉
" n6 r" T! f( N& J$ h |
-
总评分: 威望 + 20
包包 + 40
查看全部评分
|