PCR搞不定了，丢脸啊～请各位高人指教！

sykbod

手边没软件就没对你的引物，想来做了那么多引物应该没问题。0 I: o- H( L3 p' A
一般这种情况我加DMSO了 退火时间给1min
1 K! d1 T& d. Z; w3 O# a% C+ r# f: G局部超过90%应该也会有条带不会很干净，除非你两个引物刚开始p就进入高CG区。不加DMSO的话曾经做出来过72度退火才有条带的（两步法很好用 真的）。加了之后减5-10度都可以。具体看模板了。  m1 X  W2 a' X8 W& D. T
话说做一个梯度不就完事了

sykbod

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& D  p/ R( s/ d4 O
2 o% V9 \9 M/ sgenerally, if you have tried different annealing temperature and DMSO and it still not work. I prefer to design another pair of primer. You may want to use longer 5' primer.9 s3 V) K0 l5 z% @! K7 D7 l

' K  B, u: W% F8 S1 X  o+ LGood luck.