PCR搞不定了，丢脸啊～请各位高人指教！

sykbod

手边没软件就没对你的引物，想来做了那么多引物应该没问题。; ^9 j' y! P$ K* W8 }! m% i( B
一般这种情况我加DMSO了 退火时间给1min" H# S- V  P& E; x+ |# s% Y
局部超过90%应该也会有条带不会很干净，除非你两个引物刚开始p就进入高CG区。不加DMSO的话曾经做出来过72度退火才有条带的（两步法很好用 真的）。加了之后减5-10度都可以。具体看模板了。) G/ n+ V, a; z0 G
话说做一个梯度不就完事了

sykbod

回复 ying 的帖子; ?9 y5 @& u! b( i% N
2 A6 S. K7 ~2 I- w# V/ p
generally, if you have tried different annealing temperature and DMSO and it still not work. I prefer to design another pair of primer. You may want to use longer 5' primer.& g; @9 V) U* M0 j

) M5 b/ j# U1 N9 NGood luck.