求教microRNA检测！！

夜之眷属

请教各位大侠！
: m/ y" r% R6 R3 e4 E. l; U$ ~: }准备设计一些关于microRNA方面的试验，现在想检测一下细胞培养液里面是否存在microRNA，从而进行下一步的试验，请教各位大侠：) a& V6 p4 c4 q9 ]
1、怎么才能检测出培养液中存在microRNA呢？/ r  a$ C) l. [2 B0 A3 c
2、要用什么方法检测？能麻烦给我一个具体的方法吗，包括试剂选择？, G+ X0 U: O; i$ q
3、一次检测大约需要多少量的培养液？收集、保存培养液有什么特殊的要求吗？例如：EP管收集-80保存？
/ A, f4 A: F% f4、如果检测出来了，能够对相关microRNA进行什么后续的研究呢？' N  X7 x1 y4 E# f/ A2 ]4 n" r
万分感谢！！

刘艳85

microRNA是由RNA剪切获得到的，你首先得提取到RNA吧。你可以直接用培养液做荧光定量PCR吗？因为microRNA的片段只有22nt左右，所以你需要加尾，有专门卖这方面的试剂盒。microRNA后续可对前体及其靶标、表型进行分析

夜之眷属

回复 刘艳85 的帖子& D( S; A. n' L7 ~# O0 n9 X) k) d

9 h4 m; L% z6 r6 a+ m4 Y谢谢 刘艳85老师！
& v& B- ^' I* B" T+ Z' n不知道您说的这个方法能够检测出未知的microRNA吗？

刘艳85

做PCR检测不出未知的microRNA，只能检测已知的microRNA

刘艳85

做PCR设计的引物是依据已知的microRNA序列

ophden

我用过PCR检测的，需要订购专门的引物，PCR的酶和缓冲液什么的都同做普通cDNA为模板的PCR一样，只是引物要特别设计，一般找公司买的。

夜之眷属

再次感谢 刘艳85和ophden 老师！8 @6 f8 W  d6 d7 E! h
谢谢你们的指教，我现在查阅下先把引物设计出来！