干细胞培养中添加因子的作用

fanmihu1987

本人刚刚开始接触干细胞，目前还属于蒙圈状态。
: ?0 U( X5 r! Y& d; r; c( F想请教各位良师益友
( c2 I. N+ j, W7 E" u, I: G! [( i在干细胞培养中添加的物质 LIF，BFGF，2-巯基乙醇，L-谷氨酰胺
% V8 f# h) c: ^: T1 u9 F的作用都是什么？
9 t* N% i0 t+ E6 s( y2 e另外我目前在诱导成纤维细胞恢复到类干细胞状态一直未见类干细胞的集落生成。我使用的是普通的DMEM+FBS，没有添加因子，不知与此是否有关。

xiefenghe

看看日本人怎么做的不就知道了吗

jessewill

回复 fanmihu1987 的帖子
7 W5 l* j  Q# g" U. c( s( P1 |- P$ p  h% R8 f5 m, ^* I
LIF维持干性啊，2-ME是抗氧化剂，L-GULUTAMINE可以维持细胞活性的

daxi-fighting@1

回复 jessewill 的帖子
9 G3 A$ `4 N2 y3 F
# k6 C2 E' y! E3 c# V你好，那我想问，我再养人的牙根尖乳头干细胞。Root apical papilla was gently separated from the surface of the root, minced and digested in
; k3 l- h; D  L! ~& `# \a solution of 3 mg/ml collagenase type I (Worthington Biochemicals Corp., Freehold, NJ) and4 Z+ ]* D" C( U3 \5 y1 x2 l" _& h6 Y
4 mg/ml dispase (Roche Diagnostic/Boehringer Mannheim Corp., Indianapolis, IN) for 30" W# D8 c( T, v: J" L" q
minutes at 37°C. Single cell suspensions of SCAP were obtained by passing through a 70 μm
) Q2 ^9 R- |6 F; r8 Y+ g0 Bstrainer (Falcon, BD Labware, Franklin Lakes, NJ), seeded at 1×104 into 10-cm culture dishes
6 e0 Q4 }& l! K(Costar, Cambridge, MA), and cultured with α-Modification of Eagle’s Medium (GIBCO/8 {5 b1 W5 C) p! D% w
Invitrogen, Carlsbad, CA) supplemented with 15–20% fetal bovine serum (FBS) (Equitech-2 t! r3 B( y3 l4 b# ?& ^
Bio Inc., Kerrville, TX), 100 mM L-ascorbic acid 2-phosphate (WAKO, Tokyo, Japan), 2 mM. S3 u& N2 d% {* H2 l  w
L-glutamine (Biosource/Invitrogen), 100 U/ml penicillin and 100 mg/ml streptomycin at 37°5 G" i8 h$ I! K% U! w: O; j: U5 q
C in 5% CO2. 这是我要养的这个间充质干细胞的培养方法，我想问的是：1：a-MEM和DMEM的区别，当然除了成分上的区别，是不是一个促进细胞的分化？有的人养牙髓干细胞会用GIBCO DMEM/F12(1:1) 11330，有的用hyclone的SH30265.01B。2:100 mM L-ascorbic acid 2-phosphate 这个L-抗坏血酸2-磷酸酯的具体的作用是什么呢？提供vc的营养，只是比vc稳定？可是矿化诱导液里面是加了抗坏血酸的，这不是促进干细胞的分化嘛？3：我按照文献里，查到http://www.wako-chem.co.jp/english/labchem/productinf.htm 这个公司的产品只能查到L-Ascorbic Acid Phosphate Mg Salt.nH2O。sigam公司也只能查到A8960 SIGMA  L-Ascorbic acid 2-phosphate sesquimagnesium salt hydrate 。我到底该怎么办呢？这个细胞的培养 我到底该选择什么样的培养基，这个L-抗坏血酸2-磷酸酯 我该怎么买呢？麻烦您了。

jessewill

回复 daxi-fighting@1 的帖子9 E; a4 X+ R7 ?" q

, Y7 t" S/ v: v; l9 `% N: Ssorry,你的问题我真不知道额，我建议你查查别人的protocol，你的这个东西我没听说过啊

liluli0715

建议先不要加一些额外的因子，我们做的是脐带msc，只是基本培养基加10%FBS，你可以先培养试试

随风的天使

回复 fanmihu1987 的帖子$ W1 m$ \2 S* z  d& t

7 g$ u: @8 ^( c' C1 e* a  Z通常干细胞培养时添加的Lif，bfgf作用主要是抑制分化，成纤维细胞自身也有分泌抑制分化因子的作用，所以在很多的胚胎干细胞的培养时都是用成纤维细胞作为饲养层来培养细胞。巯基乙醇的作用主要是促进胚胎活着细胞贴壁。谷氨酰胺酶，是有一定的半衰期的，所以配置好的液体一般2周左右未用完，则需在培养液中补加适量的谷氨酰胺。
) W+ }  [4 p1 S你的成纤维细胞诱导液如果是单独的DMEM+FBS，没有特别的诱导成分，应该是很难出现类干细胞的集落的。我培养成纤维细胞的培养液就是简单的DMEM+FBS。希望能帮到你。

BNJN

养human ESC要加bFGF，维持干性防止分化；养鼠的加LIF，也是防止分化，二者具有种属特异性

子墨o0

我们一般是在基础培养基中添加15%的FBS来培养乳牙牙髓干细胞.而脐带间充质干细胞则是加10%的FBS或者用无血清培养基.

daxi-fighting@1

回复 jessewill 的帖子/ p2 Y' f# d( h; {0 U; d
2 L' [# M1 }  C! B( I* J+ l- }
好，还是谢谢你啊