油红O染脂滴，未染上色，什么原因呢？

lxy07

我镜下看到不少脂滴的细胞，就是没染上色，不知什么原因呢？有看过类似的帖说是空泡，怎么辨别是空泡还是脂滴没染好呢？附图说明，请各位大侠，不吝赐教！2 c4 P. R& ~7 L; j! G

receiver1

: C' C. W, D# E9 I
$ m+ X2 U( w4 ?  E我用的protocol，自己感觉很好用
9 h8 @! }) p/ u' |
  B. W' n/ E0 H- ]+ h# [& X1.称取0.5g油红干粉，溶于100mL异丙醇中，配成0.5％油红储存液，此为油红饱和液，可长期保存备用。棕色瓶保存；
0 M& Z) n$ Q3 a6 Z2.除去培养基用PBS洗涤1遍；7 N& O; U; D0 _4 ~0 O* d! s/ Z
3.加60%异丙醇固定5min；: N0 n! t( \. B. Q& F7 w
4.稀释油红储存液，油红：去离子水＝3:2，室温放置10min，滤纸过滤（除去一些杂质，染色结果更清晰）；$ R. @/ ^$ k2 e9 Y
5.染色5－10min，避光、密封。如果是培养皿或培养板，加的体积覆盖住板底即可。如6孔加1.5ml，24孔加0.5-1ml；注意事项：油红染色时应避免试剂挥发过多，否则易形成背景沉淀。+ k8 A# X% |% B+ A2 w5 z% H8 G
6. 60%异丙醇稍洗去多余染液，PBS洗；- M, P9 ~# D, D; l, J
7. 洗涤后的细胞加PBS，可以延缓脂肪滴破裂。显微镜观察，及时照相，时间过长，脂肪滴会自发破裂。; V. W, x6 J* \) L" G1 O3 ~

7 H8 D  q* `7 X9 G5 j
7 C2 G& E5 D1 e% Y8 I  h' h. c注意事项： 控制60%异丙醇洗的时间，不要过长。

ophden

可能脂肪粒太小了，就不容易染上，建议做的周期长一点。

lxy07

我当时用油红O染完后，就放在PBS里，因为有其他事情，隔了5-6天才用苏木素复染，拍照，结果就这样了

lxy07

回复 ophden 的帖子' Y' C7 @3 b. ~% K5 [

3 H9 o' R" J. ^5 I1 G& O这次我已经诱导了28天，才染色的

ophden

回复 lxy07 的帖子
/ u0 ~# l2 T4 b' k- ]# y4 V/ u6 z
, d+ d& o& y# P4 ?从图上看，你的脂肪滴的确有点小。可能诱导效率不高。

lxy07

回复 ophden 的帖子
' x% a+ M$ u& p$ W. A& F% ?6 m; f% v2 C- q
诱导率不是太高，但是是脂肪滴，油红O应该能染上色吧

luoziwei

回复 lxy07 的帖子
5 I2 `% b: x) Z  Y/ k
! n+ E2 P- w: a4 e1.分化效率不高；
$ G7 v  j: ^; a6 N( y+ h# s- t2.固定不好；
- N0 ~6 {3 l) ?8 [3.部分脂肪滴已破裂

luoziwei

回复 receiver1 的帖子7 u( A1 N- v, |0 R+ ?% \
3 m7 m! U0 `/ ~' r, N- L' b
正解。但最好异丙醇洗涤时间，5秒足矣！不宜太长。

jj2570782

阳性率太低，诱导时间一般14天足矣，请注意接种时细胞的活性，以及诱导剂的配制问题！