油红O染脂滴，未染上色，什么原因呢？

lxy07

我镜下看到不少脂滴的细胞，就是没染上色，不知什么原因呢？有看过类似的帖说是空泡，怎么辨别是空泡还是脂滴没染好呢？附图说明，请各位大侠，不吝赐教！
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receiver1

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我用的protocol，自己感觉很好用* o* T7 `' |5 e5 t

! }9 w1 x0 {& e1.称取0.5g油红干粉，溶于100mL异丙醇中，配成0.5％油红储存液，此为油红饱和液，可长期保存备用。棕色瓶保存；
, f/ ^8 ]1 u; d9 [/ u, s: x2.除去培养基用PBS洗涤1遍；) V8 K4 ~. g8 B
3.加60%异丙醇固定5min；9 K) [; x; \! ^& N3 J2 L1 k
4.稀释油红储存液，油红：去离子水＝3:2，室温放置10min，滤纸过滤（除去一些杂质，染色结果更清晰）；, W8 N1 J! j7 K) e- `
5.染色5－10min，避光、密封。如果是培养皿或培养板，加的体积覆盖住板底即可。如6孔加1.5ml，24孔加0.5-1ml；注意事项：油红染色时应避免试剂挥发过多，否则易形成背景沉淀。
5 l0 ^* u/ w' ]6. 60%异丙醇稍洗去多余染液，PBS洗；! k% U& ]( f# H6 h& v
7. 洗涤后的细胞加PBS，可以延缓脂肪滴破裂。显微镜观察，及时照相，时间过长，脂肪滴会自发破裂。) |; m8 h8 [. r2 s& U2 }9 a

0 a! }+ G) l! }) F7 `) ~: J
2 D% E% D1 s- b" H注意事项： 控制60%异丙醇洗的时间，不要过长。

ophden

可能脂肪粒太小了，就不容易染上，建议做的周期长一点。

lxy07

我当时用油红O染完后，就放在PBS里，因为有其他事情，隔了5-6天才用苏木素复染，拍照，结果就这样了

lxy07

回复 ophden 的帖子
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这次我已经诱导了28天，才染色的

ophden

回复 lxy07 的帖子: y  y$ o7 f+ b2 k2 \
. T; o2 A2 ^  p+ ^
从图上看，你的脂肪滴的确有点小。可能诱导效率不高。

lxy07

回复 ophden 的帖子4 R9 f* n: M2 s; X2 U, W7 N5 O

% f; l! E* R# C8 l诱导率不是太高，但是是脂肪滴，油红O应该能染上色吧

luoziwei

回复 lxy07 的帖子
, {9 |' x8 B1 V9 s, J7 ]. E8 y4 P' @: `. L6 N5 Z3 o* N
1.分化效率不高；& m: t6 A! |7 Y; ]4 i$ E
2.固定不好；
  B& ?- [- W5 [! z6 n- K3.部分脂肪滴已破裂

luoziwei

回复 receiver1 的帖子
, h) G) M$ O7 v- n4 m# z6 d' d0 v' O/ z- G( f% m) @! w& A. x1 E
正解。但最好异丙醇洗涤时间，5秒足矣！不宜太长。

jj2570782

阳性率太低，诱导时间一般14天足矣，请注意接种时细胞的活性，以及诱导剂的配制问题！