油红O染脂滴，未染上色，什么原因呢？

lxy07

我镜下看到不少脂滴的细胞，就是没染上色，不知什么原因呢？有看过类似的帖说是空泡，怎么辨别是空泡还是脂滴没染好呢？附图说明，请各位大侠，不吝赐教！; \9 w) Y  j1 {2 p' ]: h

receiver1

) @" M9 R: G9 v# }# [  i( q; ~" B" }, ~
我用的protocol，自己感觉很好用
& @9 C: l0 }8 `1 u7 s
/ S; r) D" b# Z1.称取0.5g油红干粉，溶于100mL异丙醇中，配成0.5％油红储存液，此为油红饱和液，可长期保存备用。棕色瓶保存；
8 S& l& \. J2 d; P2.除去培养基用PBS洗涤1遍；
" Y$ }* v& ^8 I1 W1 s3.加60%异丙醇固定5min；! C. M6 I8 ^' C8 I
4.稀释油红储存液，油红：去离子水＝3:2，室温放置10min，滤纸过滤（除去一些杂质，染色结果更清晰）；
' w6 R3 s1 a' v2 ~5.染色5－10min，避光、密封。如果是培养皿或培养板，加的体积覆盖住板底即可。如6孔加1.5ml，24孔加0.5-1ml；注意事项：油红染色时应避免试剂挥发过多，否则易形成背景沉淀。
5 W: e5 o4 C0 b, P; c2 j" E2 i5 X6. 60%异丙醇稍洗去多余染液，PBS洗；
, ?- d3 R8 D! B& P( a" E7. 洗涤后的细胞加PBS，可以延缓脂肪滴破裂。显微镜观察，及时照相，时间过长，脂肪滴会自发破裂。- m; y  n: y  r. M
! o8 M. R9 Z9 a6 W; S9 t9 b8 Y

: X) v) S( q2 V- Z7 w' o7 n9 I注意事项： 控制60%异丙醇洗的时间，不要过长。

ophden

可能脂肪粒太小了，就不容易染上，建议做的周期长一点。

lxy07

我当时用油红O染完后，就放在PBS里，因为有其他事情，隔了5-6天才用苏木素复染，拍照，结果就这样了

lxy07

回复 ophden 的帖子
  y4 ?- N" {+ I2 w+ u, I- u! a4 r
1 c6 u; G$ t' C9 R8 e: J这次我已经诱导了28天，才染色的

ophden

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. X+ t4 o2 ]9 i& _. D+ h
  {% d: L% n9 L& z" b- |从图上看，你的脂肪滴的确有点小。可能诱导效率不高。

lxy07

回复 ophden 的帖子+ I$ q4 h  B  `7 }- j

) r  c' a0 z+ l3 W诱导率不是太高，但是是脂肪滴，油红O应该能染上色吧

luoziwei

回复 lxy07 的帖子, o1 Z: v' m& G' i9 g) Y# {  E

4 X4 w7 |" `8 }* S  \1.分化效率不高；
+ c1 k' d$ W* Q/ k" k# p2.固定不好；# y+ d# S/ z; j
3.部分脂肪滴已破裂

luoziwei

回复 receiver1 的帖子! b% w  Y  U9 V1 F/ _' _- D2 }7 D

# D! I0 [) S# ~5 Z9 S# }正解。但最好异丙醇洗涤时间，5秒足矣！不宜太长。

jj2570782

阳性率太低，诱导时间一般14天足矣，请注意接种时细胞的活性，以及诱导剂的配制问题！