求助，大家帮忙看下iPSC上的小圆点是什么？

ligangtiancai

如图，本人的iPS上有很多发亮的小圆点，怀疑是支原体，但也无法确认，大家帮忙鉴定下，谢谢！
4 q% ]/ P  o0 i: d4 YP.S  iPSC在做EB时EB周围死细胞较多，是否和此小亮点有关？

playboy723

我以前在做小鼠MEF的时候发现在小鼠身上就有这个东西，所以应该是做原代培养时从小鼠身上带下来的东西，这个东西在细胞状态好时一般不出现，一旦当细胞状态稍微不好时便大量产生，换液也不好使，只有消化下来低速离心2次才会少些，但也是完全清除不了。如果你的ES细胞有抗药标记那就好办多了，直接加G418或杀稻瘟菌素培养几代就OK了。曾经深受其害，至今仍深恶痛绝！

184lj

收集细胞培养液，PCR检测一下，就知道是不是支原体污染了。

dilal

支原体肉眼不可见，细胞状态还行，饲养层感觉有些老化了，

ligangtiancai

回复 wolfgang 的帖子8 j( U: n6 m5 E

7 u" d+ F3 o3 W! [0 Q好的  我明白了 ，准备扔了，谢谢！

wolfgang

以我个人的经验，我觉得基本可以确定是支原体，楼主最好去做支原体检测，支原体阳性dapi染色可以看出细胞核和细胞外面都有雾状蓝色出现。黑点不是支原体聚集造成，而是细胞在应激状态下的代谢产物。支原体对于重编程和分化进程影响很大，造成实验根本没法做，我等深恶痛绝！

ligangtiancai

回复 XIE冬D 的帖子; f. K! ?& z/ o
0 h# G4 j- x" |2 K$ r, A5 \( D
是不是我的细胞已经受到什么影响导致贴壁能力下降、消化过快？

ligangtiancai

回复 XIE冬D 的帖子
0 S* z2 ]% c+ M$ x. i
% f/ s" l8 o$ p: B, ~' Z0 w3 X; ]能给我说一下你使用的胰酶的货号么，谢谢！

ligangtiancai

回复 XIE冬D 的帖子- m+ o& I9 Z8 w( J

" z, f4 H+ c$ ^% Y9 Q" o我的iPS消化非常快，基本上加进去、过火封口、再镜下观察（合计小于30s），细胞就已经脱壁了，用了2种自己配的胰酶（+0.02EDTA）和一种PAA公司的胰酶（无EDTA）都是这种情况，而且是整个克隆都下来了，然后再吹打上20次左右基本就成单细胞了。。

XIE冬D

回复 ligangtiancai 的帖子8 O. C7 F8 O" A
2 F6 Q. ~# T1 \6 g) z' n
估计就是吹打太用力了，我师兄说细胞磕不死但是会被吹死，所以如果未成单个细胞可以终止消化，轻轻磕一下，另外，消化时间一定不能过长，如果不放心的话，可以镜下观察，我之前不能把握消化力度的时候就是这么干的。