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请教真菌污染的检测方法 [复制链接]

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包包
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楼主
发表于 2012-4-6 18:02 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
请教真菌污染的检测方法,以及细菌污染的检测方法。经验不足,目视可信度有点小。本着快速灵敏的原则,都有什么方法,谢谢!
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沙发
发表于 2012-4-6 22:56 |只看该作者
看你要检测什么东西了。要是培养基,直接放一滴到皿里培养24hr,估计就能看出来了。
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藤椅
发表于 2012-4-6 22:57 |只看该作者
网上搜到了一个各种污染的整理
( l' t3 E8 Z# N# Lhttp://www.med66.com/html/ziliao/yixue/11/72afaa5ec9ae03edea662cbdc7a87c6d.htm
% @' R4 O6 J* F& }" E细胞培养中常见的污染情况总结如下:
9 I4 H! b+ g: ?  M' }; ]7 ]常见的污染如下:
) _" q  G+ Z) V& k5 I& f1、细菌:细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状,根据感染细菌的不同,可有不同的外形,培养液一般会浑浊变黄,对细胞生长影响明显。. x- Z& ]$ ~  i' u% @5 t
仔细检查一下器皿的灭菌情况,是否在高压灭菌时放气时间足够,压力足够!尤其是和储存培养液接触的移液管等物品,连续两次污染的话有可能造成储存液污染,一定要注意!下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象!
5 |1 L! @& i5 y可在培养液中加相应的抗生素处理. |8 L; ?* ?+ E* j

3 ]* C. K  C& r2、霉菌:培养液是清亮的,倒置显微镜下无杂质,37度孵箱培养2-3天,仍清亮,但出现絮状杂质,镜下可见呈细丝状的团状漂浮物,可看到明显的菌丝,细胞仍可生长,但时间长之后,细胞的活力状态变差,: z% H' ~1 F! {) V; u3 d4 h
用硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内,再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。  H1 x# D+ @0 q$ J
CO2孵箱被霉菌污染后,可把所有细胞暂时转移,采用过氧乙酸擦洗孵箱(包括隔板,箱壁)。并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时,使其蒸汽弥漫。待过氧乙酸的气味消散后,再移入细胞。孵箱应定期清洁(2月左右),尤其在多雨的季节。& s' }  `& B1 |* {( ]1 e) _% V
其它培养箱清洗方法是:用84液擦洗-清水擦洗-75%酒精擦洗-紫外灯照。
$ d0 X4 c, P7 U" A预防霉菌污染,可在培养基里加3u/ml的两性霉素或制霉菌素或放线菌素D或双抗;但细胞一旦污染,很难挽救,制霉菌素或放线菌素D或双抗都于事无补,建议舍弃该污染细胞。,将环境彻底消毒,如果所有细胞都污染,可能是系统污染,检查一下培养基和器材,如果只是个别污染,可能是操作问题,就要注意操作 ' K. q$ P- j/ A, C! v- T
! ?2 K! m  h9 q+ P) N" \6 `
3、支原体:黑色的,好象多为多形,培养液一般培养液一般会浑浊,原体感染,国内血清很多都没有做支原体阴性检测,而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。而且它不能用过滤的办法除去。支原体感染细胞以后,细胞病变不很明显,只是慢慢死去。
4 |/ w: _. a1 u9 E" E) [# }用泰乐菌素,兽用支原体病的药,但可用于细胞培养,无任何不良反应。Sigma公司的使用时用50ug/ml Tylosin培养液培养6天或连续传两代即可清除支原体污染。如果作为常用的抗生素的话, 建议用8ug/ml的浓度。
8 s  v& M' ^2 ^  K
8 |8 X* V/ M; f) L, T" i4、黑蛟虫:可以穿透滤膜,也可以通过空气传播,低倍下为黑色点状,高倍下可看见黑色的小虫游来游去,培养液也是不浑的,一般不会太影响,细胞还是可以用的。常常是细胞生长状态良好,且观测到的运动物无明显增多,且培养液颜色、透明度无明显变化,可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象。对细胞生长状态不会有明显影响,在细胞增殖旺盛之后会自然消失,除更换血清外无须特殊处理。建议如果细胞有可能是此种污染的话,可以增加细胞的种板密度,以提高细胞的生存率。( u8 `% Y- Q  ]: b( D
; l; G9 V6 D" P
5、真菌:一般培养液清亮,不变色,镜下有丝状物,有些真菌开始很像死细胞碎片,只是它很多很多的小块很清楚,象珊瑚状,不象细胞碎片分不清,慢慢的会长出很细的黑色丝状物。真菌生长的比较慢,不象细菌那么容易被发现,但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了,也很难救活了。
$ t* S# y( e% |+ a( V+ b% P5 S. Z, t" c" y* W& D
6、原虫:培养液可轻微浑浊,显微镜下那些细小的点状物数量非常多,轻微活动,细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢,而且细胞状态不好,边缘不清楚,细胞不透亮。他们与细胞可共生但会与细胞争夺营养。这种共生是非常普遍的,但他们的数量小,细胞站优势所以不会影响到细胞的正常生长,只有当他们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长,最终形成恶性循环。
( J8 F* j# F- _  I: n$ F8 q4 D9 Q( C, J$ B5 y' c3 F3 A
污染的可能原因:可能原因很多比如配液消毒问题、操作问题、环境问题等等
' u' }/ k, r2 Q; u# L0 b+ f, x' {关于培养基的无菌状况,取培养基至培养瓶中(不加细胞),37度试培养一段时间后观察。如果没有细菌生长 就是操作的问题。+ n( v% T) b6 I7 E& K3 c0 d4 y
也可以在培养基中事先加入双抗(硫酸链霉素和氨苄青霉素)。但双抗有时会影响细胞的状态,所以在做转染、检测细胞某项指标前一定要撤去双抗,以避免影响实验结果。2 m: r. i7 ]8 t" `( s9 \& U
1 |" c& B. @% S5 }: `: P* s  A2 y
1、孵箱应定期用三氧机消毒 或者 紫外光照射,并用酒精和新洁尔灭试擦孵箱同时孵箱内的水应是三蒸水
7 ^8 b9 \+ a, C6 l% f+ i2、超净台\取材\器材\培养液\培养瓶\操作等因素
$ G& r3 K: n  U2 ?5 A) L3、超净台的风机不能过大,风机到6-8格。否则也可能能致霉菌污染
# D7 y9 j2 t# g  T& z7 C) v4、无菌室经甲醛熏蒸消毒后,可用同等量的氨水喷洒中和,约几小时即可进入操作。
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板凳
发表于 2012-4-6 23:24 |只看该作者
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回复 geminigg 的帖子* l9 S% c( B. V6 ?: W) r

: x3 B. o1 v' r. J3 a$ J非常感谢。我目的想知道是具体的检测方法,就是有一个结果,比如用培养法测细菌,或凝胶法测内毒素及PCR测支原体等。镜检目视的方法不包括呵呵。最想知道的是有没有快速检测是否真菌污染的方法。

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报纸
发表于 2012-4-11 09:32 |只看该作者
有测试的工夫不如扔掉重新养,如果不是珍贵的细胞的话,真菌的特点是一般培养基还是清澈的,不是浑浊的,真菌污染长的也较慢,你可以拍照给大家看一看
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