如何设计miRNA正向引物

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首先要看你的逆转录的策略，有些是在逆转录过程中加上很长一段尾巴，这样，在PCR时，上游是成熟miRNA的部分序列，下游是根据共用的"尾巴“的最后一段。如果逆转录不是这样做，PCR引物设计策略也要相应修改的 ，如果用茎环结构设计引物，不是在3‘端加尾，那上游引物取成熟序列前14-15个碱基。我的实验步骤，在这14个碱基前加了GGG（或者GGGG）这样上游引物碱基数目就达到17-18个了。