求助，MEF卷边脱落！

ligangtiancai

我的CF-1 MEF在原代后4天半第一次传代，一传三，传代后第二天观察细胞贴壁良好，形态也不错。但第三天去观察时三瓶细胞镜下观察均出现卷边的现象，肉眼观平底皱褶，平底边缘整个细胞层卷边并有脱落（是nunc的t75 flask），做了这么长时间MEF第一次出现这种问题，请大家帮忙分析下原因，谢谢！

zpzp0312

原因很多2 h. T& w  L# Y6 g
1，geltin包被不好
8 q1 v! j: Y* ?; a6 J2，饲养层太密
: a/ n: q8 [/ [! O3，换液温度和ph变化较大

ligangtiancai

回复 zpzp0312 的帖子" ]8 |5 i1 W3 X4 u' }& O% M) t
1 f9 C6 q9 ]  I# U& l3 H8 O
1. MEF 培养应该不需要gelatin
! V; p0 J' X' `) W$ u/ I5 _2. 我做的是MEF传代，还没有铺，
: T2 D# q9 |+ G! i3. 换液后第二天一切正常，第三天出现以上情况。

genedu

我也遇到过这种情况，现在总结大概有两点：最重要的就是细胞密度太大，建议1传10都没问题，1传3有可能密度太大。2.温度落差太大，培养箱的37度到外面换液，假如液体没有提前预热，有可能卷边

ligangtiancai

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5 }6 z, D1 y8 K7 f; f- _! J, ~0 \
好的 可能是密度太大了吧 请问这种情况下细胞传代后还能存活吗

ligangtiancai

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+ B6 V' V0 z+ i1 o' R7 T5 O
( V2 \' x( E4 j* [, [3 W+ M* U' i今天又去观察了一下，MEF几乎全部卷边，而下面还有一层，不知是否是因为太密而脱落。

zpzp0312

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( U$ g) M: |, f& J' M0 [4 Y* v5 |5 G. U- T# l3 N! [) L( J- a. _
如果消化继续培养，是可以存活的
% q9 ~8 A+ |/ V( O6 @你看，卷起来以后下面还有一层，看来的确是密度大造成的了
  _# i! e" n8 x但培养时密度也不必太稀，没关系& E4 N. @' M! \: {7 W" R
另外，可以铺明胶，是有作用的( X4 M. t0 h& h! B" p8 f% Q
你可以比较一下9 a1 B: B. u; S+ H; F5 Q" W
状态在镜下就能看出来区别

ligangtiancai

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# {5 b) e( c7 B1 r' i1 L3 K# a0 M5 ^  {: I
看样子像是密度太大的问题，不过我同学用的同一批细胞，只不过传代比我早了15个小时左右，他也是一传三，就没有出现这个问题。

zpzp0312

回复 ligangtiancai 的帖子% f; w! X; z4 g5 O' O6 r1 i

- f& D0 ?% e6 r5 N3 Y不用讨论了
1 x, r5 Q" C# B; D+ i如果是用来养ES细胞。铺明胶，密度适当小一些
' K' V# n7 ]2 y* A毕竟卷边也就是偶发事件

genedu

回复 ligangtiancai 的帖子* H9 d0 P5 V: ]8 B& X

6 D' W! k5 t% _2 _# q, }能活，不过状态就不会很好了，建议重新解冻。如果传代的话，会有口香糖状粘稠物，不易吹打开