目的蛋白条带和actin大小很接近 如何处理？

wangsandan0503

我要的目的蛋白条带，和β-actin大小差不多，需要怎么弄？或者换用别的什么内参？
" ^: Y. K, K( Y2 V

momocy

可以换别的内参，如果你有的话，是最好的。但是如果实在没有，先显影你的目的蛋白，显完之后TBST洗一下，再用β-actin的一抗封闭，接着二抗，再显β-actin是可以的。

wangshumin12311

兄弟分两个泳道跑，，，分别孵育一抗，

telomerase

可以杂完一个，洗了再杂另一个, l% H* P) s7 n+ B
或用双荧光（远红外的抗体)，用gene的奥德赛（ods？？，忘了怎么拼了）来检测4 D2 x- c3 t4 i4 ~# M: ^
同时两块胶来做

wangsandan0503

- H/ o" [; X. L7 c3 ^9 a" N/ [5 r0 E7 t2 ?
回复 momocy 的帖子& y0 z, n: Z2 `5 R9 a; f
4 s0 a+ }' L& G9 u* u
我可以换为GAPDH吗？我的条带42kda

momocy

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8 H* |3 i: y  X. K+ K9 G
3 M1 ~  i4 `6 ~6 u% l$ O前面那位说的对，你在一块胶上分两个孔跑，分别敷一抗，是最好的办法

mayansen1314

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/ ^. F; ?) r/ C7 w: g8 A1 x& @# ]5 Y( M; J/ J3 S1 j
PVDF膜重新显色.pdf (226.26 KB)

2012-4-23 13:02 上传

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PVDF膜重新显色
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我觉得你这不靠谱，光是TBST就能把目的蛋白的一抗二抗发光液都洗下来？建议楼主还是平行点上两个孔，然后一半加内参，一半加目的蛋白抗体。

daviddow

碧云天买个一抗洗涤液就可以了

biotly

如果实验室有GAPDH（36KDa）或者β-Tubulin（55KDa），那就果断换内参好了，如果没有，那就买一个strip buffer（也可以自己配）把一抗洗掉再杂actin，或者像楼上说的两个泳道分开杂。

momocy

回复 mayansen1314 的帖子3 ?. j# e! ~) w0 c' T9 J

; C3 d7 N6 h! v# r  V) \9 y& [我老板做过很多年，告诉我可以，我也用了，可以。因为内参显影出来很强，没什么问题。但是若是两个条带几乎重叠，多少会有影响，尤其是表达量比较高的蛋白，毕竟不如平行2个孔的清楚了。平行2个孔方便的话大可不必用。
: I1 x* V# `! ^1 P6 p总结了说，亲，前后显影是可以的，包括显影完了把膜保存起来，以后需要显的时候再拿出来显也是可以的，条带是否清楚和检测的蛋白表达量和条带重叠度有关。