目的蛋白条带和actin大小很接近 如何处理？

wangsandan0503

我要的目的蛋白条带，和β-actin大小差不多，需要怎么弄？或者换用别的什么内参？ 1 O- x7 }) a3 s+ T7 Y( A

momocy

可以换别的内参，如果你有的话，是最好的。但是如果实在没有，先显影你的目的蛋白，显完之后TBST洗一下，再用β-actin的一抗封闭，接着二抗，再显β-actin是可以的。

wangshumin12311

兄弟分两个泳道跑，，，分别孵育一抗，

telomerase

可以杂完一个，洗了再杂另一个0 N/ d1 C$ n) [) B! X
或用双荧光（远红外的抗体)，用gene的奥德赛（ods？？，忘了怎么拼了）来检测! ?& e" R" x+ w/ q
同时两块胶来做

wangsandan0503

6 B* Q( c9 V/ A1 p2 r3 ]( {
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+ c" i) D. \2 \' R我可以换为GAPDH吗？我的条带42kda

momocy

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( V5 W& I: N4 M4 ^9 Z% N. q+ _* s' V: p7 w
前面那位说的对，你在一块胶上分两个孔跑，分别敷一抗，是最好的办法

mayansen1314

回复 momocy 的帖子) q4 h% Q; m# V9 w$ R% _/ c2 O8 `# i/ M
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2012-4-23 13:02 上传

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我觉得你这不靠谱，光是TBST就能把目的蛋白的一抗二抗发光液都洗下来？建议楼主还是平行点上两个孔，然后一半加内参，一半加目的蛋白抗体。

daviddow

碧云天买个一抗洗涤液就可以了

biotly

如果实验室有GAPDH（36KDa）或者β-Tubulin（55KDa），那就果断换内参好了，如果没有，那就买一个strip buffer（也可以自己配）把一抗洗掉再杂actin，或者像楼上说的两个泳道分开杂。

momocy

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& P( \3 X& c& F* p3 g9 G: v  v+ [' K+ h8 P
我老板做过很多年，告诉我可以，我也用了，可以。因为内参显影出来很强，没什么问题。但是若是两个条带几乎重叠，多少会有影响，尤其是表达量比较高的蛋白，毕竟不如平行2个孔的清楚了。平行2个孔方便的话大可不必用。
( A* B/ w/ t4 J$ l总结了说，亲，前后显影是可以的，包括显影完了把膜保存起来，以后需要显的时候再拿出来显也是可以的，条带是否清楚和检测的蛋白表达量和条带重叠度有关。