养细胞的一些疑问

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1.  5%的二氧化碳当然很重要。这对于模拟体内环境至关重要，有利于细胞在类似于体内的环境内生长。一下午二氧化碳没达到4%可能是因为你二氧化碳钢瓶的阀门开的太小。
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% g; n8 a7 Z  b* }) @: |' ?2.  血清不好的话，细胞会变老如成纤维细胞，或分化并开始死亡如干细胞，这是我养细胞的经验。你的细胞刚开始贴壁，让后越长越脱落，估计是血清不好。国产的胎牛血清，都是假的，我通过内部人士打听过，都是牛出生24h内取的血，所以应该是新生牛血清。
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( j% K: ?5 ?; }7 Y4 g: D# U3.  一定要100%湿度。培养箱底用大口不锈钢托盘加水，定期更换，一般每周更换。如果不是100%湿度，培养基中水分会挥发，培养基会变稠，离子浓度大，变成高渗溶液，细胞当然会死！我们有一次用活细胞工作站时，忘记了加水，结果细胞全死了！0 t  n, o: t5 @8 t2 p

& N, p5 u, v7 f( E4 }0 D! G4. 细胞在分裂时，会变圆并隆起。如果培养基内没有大量漂浮的死细胞，就不用担心。当然不同的细胞其状态不同，生长状态不好时也可能会出现你说的这种情况，这主要靠经验确定。
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5. 血清等在生产时是无菌的。你拿进细胞间时用75%酒精喷一下就可以了，当然你也可以用紫外照，没问题的，灭菌用的紫外都是UV C，不能穿透瓶子，甚至一张纸也穿不透，如果你不放心，喷酒精就行了。3 J  G6 y' k' h9 R' X( z6 m

; @# X8 i8 F# h. ]8 G" L, e' A( F我们都是用Hyclone的DMEM（高糖）。
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8 e. |: q! I/ {" b! P补充内容 (2012-4-23 10:26):
/ d( h# F# B- T7 s1 {/ U# k当然你拿75%酒精喷的是血清的包装瓶，呵呵，不可能直接喷到血清中。

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回复 huangcong1988 的帖子
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7 I' N# P6 u0 |2 S0 r5 o漂浮的细胞很多说明你的培养条件不好，细胞死了才会飘起来。' g2 s% w4 a0 a0 a3 s5 \! f
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成纤维细胞是很好养的。我用的配方：高糖DMEM（Hyclone, 货号SH30022.01B，很便宜，大约50元/瓶500ml）+10%胎牛血清，1X双抗。/ u" Z! E4 ]9 }, v$ D3 u: z/ Q2 w

: m. Q& W2 i" g; @4 G: _/ g$ _! `如果还养不好，估计是你血清不好，或者培养箱有问题。) {1 j+ b( N4 \8 w4 }
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补充内容 (2012-4-24 11:58):
( N1 R  R3 O  I8 ~漂浮的那些圆圆的、亮亮的都是死细胞。