养细胞的一些疑问

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1.  5%的二氧化碳当然很重要。这对于模拟体内环境至关重要，有利于细胞在类似于体内的环境内生长。一下午二氧化碳没达到4%可能是因为你二氧化碳钢瓶的阀门开的太小。! u7 }$ v4 [8 P8 S1 L# o
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2.  血清不好的话，细胞会变老如成纤维细胞，或分化并开始死亡如干细胞，这是我养细胞的经验。你的细胞刚开始贴壁，让后越长越脱落，估计是血清不好。国产的胎牛血清，都是假的，我通过内部人士打听过，都是牛出生24h内取的血，所以应该是新生牛血清。# E; C, m  d+ R; `+ E

0 `' w0 m3 A5 v! X9 x3 Q: v3.  一定要100%湿度。培养箱底用大口不锈钢托盘加水，定期更换，一般每周更换。如果不是100%湿度，培养基中水分会挥发，培养基会变稠，离子浓度大，变成高渗溶液，细胞当然会死！我们有一次用活细胞工作站时，忘记了加水，结果细胞全死了！
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4. 细胞在分裂时，会变圆并隆起。如果培养基内没有大量漂浮的死细胞，就不用担心。当然不同的细胞其状态不同，生长状态不好时也可能会出现你说的这种情况，这主要靠经验确定。
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6 q4 W' ]9 w2 Z( G8 B5. 血清等在生产时是无菌的。你拿进细胞间时用75%酒精喷一下就可以了，当然你也可以用紫外照，没问题的，灭菌用的紫外都是UV C，不能穿透瓶子，甚至一张纸也穿不透，如果你不放心，喷酒精就行了。
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我们都是用Hyclone的DMEM（高糖）。: B) q, ~) O3 J
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补充内容 (2012-4-23 10:26):
: F5 T1 C& x  B9 x) n8 S* _* i当然你拿75%酒精喷的是血清的包装瓶，呵呵，不可能直接喷到血清中。

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回复 huangcong1988 的帖子
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4 r+ p1 K" V3 L; r7 P' ^漂浮的细胞很多说明你的培养条件不好，细胞死了才会飘起来。$ ~, k2 n/ F$ c
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成纤维细胞是很好养的。我用的配方：高糖DMEM（Hyclone, 货号SH30022.01B，很便宜，大约50元/瓶500ml）+10%胎牛血清，1X双抗。
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如果还养不好，估计是你血清不好，或者培养箱有问题。
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补充内容 (2012-4-24 11:58):( q4 }6 H+ o% x# L. J
漂浮的那些圆圆的、亮亮的都是死细胞。