脐带间充质干细胞培养问题

hyf198675

两周前我用酶消化法培养脐带间充质干细胞，一周前好像看到集落了，但现在处于生长停滞状态，细胞不多，各位能不能帮我分析分析原因啊，我这个月刚开始培养间充质干细胞。我用的培养基是DMEM/F12，加的血清是新生牛血清，不是胎牛血清，这对细胞生长影响大吗？

luoziwei

新生牛血清肯定没有胎牛的好。

shizhu198511

8 N; M* b/ o+ D! g2 D; ~1 D" V. ~) ]$ }1 u( B
回复 hyf198675 的帖子5 X+ G+ r( }8 z8 f' W8 B, t; z  G
1 c, X3 f6 K2 _* }  w: w% l: K0 o
1.血清的问题我看到文献大部分是胎牛血清，自己用的是澳洲源的Gibco，新生牛的没试验过，5 Z. a, n4 {. ]5 g4 E
2.细胞密度的问题，密度低话也长不起来
) `* ^2 w5 }: b/ v5 a$ h9 {! p3.没及时换液的问题
! r6 O4 {7 t- }4 P1 P3 `7 ~4.可能支原体污染的问题
6 e; O0 _# [: F2 g# a5 W5.其它
& x6 E* G5 p4 C/ Z# ?) K% N& \, Z% n( v' c$ y
只能想到这些了！0 J7 S7 X2 y+ a# m' f5 |% _  w
$ e* J5 u4 A2 E% r$ o8 z
楼主传点图片上来看看！

冰枫de梦

胎牛血清和新生牛血清的差别没那么大吧，我们实验室两种都定过，没用出来有什么差别。

xiaolong

回复 hyf198675 的帖子
/ v2 D+ U$ ]9 a, W2 ]
# Y5 |, }9 L' s. r- Y问下楼主，你用的什么酶进行消化的，消化的时间多少？消化时间不能太长，太长对细胞损害大，细胞密度小肯定很难长起来的

Demon_CN

消化养细胞的话长细胞比较快，大概6-7天就有细胞出现。
. H& v; {) D8 @5 V% Z但是消化时间比较难掌握。% a% Y  O, _) v
首先要确定，你是否过度消化了，: P) y. z, V1 {* d
再确定你的培养条件，
3 q6 B9 b% ?" F- }! P) i6 ^  @然后、根据你已经有点细胞爬出来，我想问下你隔多久换的液
; O6 J% H& h" M9 O建议你把你细胞的状态发出来看看
3 l# B3 y2 |8 T% w) c+ T4 s1 b说下它的形态，消化下来的细胞贴壁状态，有点长出的细胞形态

hyf198675

回复 xiaolong 的帖子# l$ d2 g/ a5 l% A: g5 E2 o: I  F
% W3 M( u/ r* e' ]
我是用0.1%二型胶原酶消化4小时，用PBS离心后再用2.5%胰蛋白酶消化30分钟

hyf198675

回复 shizhu198511 的帖子$ o8 N4 I' Q8 X: q% A9 [
( Y# U$ v" g; Y  Q) c* o+ O; F1 `4 g
谢谢

hyf198675

回复 Demon_CN 的帖子: N  B" @- d/ }: Y2 R
; D" {# k  N6 x  ^! W3 u* m
我是用0.1%二型胶原酶消化4小时，用PBS离心后再用2.5%胰蛋白酶消化30分钟，也是在这论坛里看到的；我到第八天时完全换液一次，中间是加培养基。不是说细胞不多，培养基颜色没改变不用换液吗？还有怎么判断过度消化？看细胞状态是拍了照片直接上传吗？多谢！

hyf198675

回复 冰枫de梦 的帖子+ u( U6 H; W+ Y( m- R3 r2 B% Z* U. r

% `3 f# [. ~  ~8 Z5 V; B% [7 ^那你们新生牛血清浓度是多少？多谢