脐带间充质干细胞培养问题

hyf198675

两周前我用酶消化法培养脐带间充质干细胞，一周前好像看到集落了，但现在处于生长停滞状态，细胞不多，各位能不能帮我分析分析原因啊，我这个月刚开始培养间充质干细胞。我用的培养基是DMEM/F12，加的血清是新生牛血清，不是胎牛血清，这对细胞生长影响大吗？

luoziwei

新生牛血清肯定没有胎牛的好。

shizhu198511

5 U1 N" t( R! X5 f4 ^
5 j0 i5 }" c* ~5 b% S回复 hyf198675 的帖子
# `) A5 X$ h/ U, L* N' Q- y! A+ L+ t' H; ?) ]
1.血清的问题我看到文献大部分是胎牛血清，自己用的是澳洲源的Gibco，新生牛的没试验过，9 h1 _2 D1 \- X. |: k* f+ ~
2.细胞密度的问题，密度低话也长不起来  [1 ]8 S& ?5 P4 O* G. T- ]
3.没及时换液的问题
2 V7 \9 }: D4 p, W4.可能支原体污染的问题  _& N/ y2 i! W. [* n$ T
5.其它
$ Z* b2 x$ r6 X% v* l/ W
! d' K, Z( S+ K3 C只能想到这些了！$ G9 i( }5 Z1 v" O" M. b! w3 c
* L+ I7 Y& q" ~
楼主传点图片上来看看！

冰枫de梦

胎牛血清和新生牛血清的差别没那么大吧，我们实验室两种都定过，没用出来有什么差别。

xiaolong

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# V: J3 v7 m" `& N8 m3 B( `) O" e' l& A: l
问下楼主，你用的什么酶进行消化的，消化的时间多少？消化时间不能太长，太长对细胞损害大，细胞密度小肯定很难长起来的

Demon_CN

消化养细胞的话长细胞比较快，大概6-7天就有细胞出现。  i7 a1 i3 [# U
但是消化时间比较难掌握。
; ^. a2 J% ?  t. P+ z4 o首先要确定，你是否过度消化了，
& y3 G& _5 ~- k& w. R再确定你的培养条件，
) q2 Z5 {3 {# k/ U1 g' o' I然后、根据你已经有点细胞爬出来，我想问下你隔多久换的液
  n( q, g- Q1 G; Y+ F; L! H$ R建议你把你细胞的状态发出来看看  @& f$ X. e2 c2 i
说下它的形态，消化下来的细胞贴壁状态，有点长出的细胞形态

hyf198675

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* ?- k0 n. s7 s) y& u
) ^+ w$ t6 l6 e0 @我是用0.1%二型胶原酶消化4小时，用PBS离心后再用2.5%胰蛋白酶消化30分钟

hyf198675

回复 shizhu198511 的帖子+ `& b& i, U  H! @1 U3 _7 C; q

& g# Z2 Y/ q: I% g$ y4 p- I谢谢

hyf198675

回复 Demon_CN 的帖子1 R4 k0 J0 `: _1 R9 m& C( ^' A6 {( ^# |
- X+ T/ B' B3 I3 t
我是用0.1%二型胶原酶消化4小时，用PBS离心后再用2.5%胰蛋白酶消化30分钟，也是在这论坛里看到的；我到第八天时完全换液一次，中间是加培养基。不是说细胞不多，培养基颜色没改变不用换液吗？还有怎么判断过度消化？看细胞状态是拍了照片直接上传吗？多谢！

hyf198675

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那你们新生牛血清浓度是多少？多谢