脐带间充质干细胞培养问题

hyf198675

两周前我用酶消化法培养脐带间充质干细胞，一周前好像看到集落了，但现在处于生长停滞状态，细胞不多，各位能不能帮我分析分析原因啊，我这个月刚开始培养间充质干细胞。我用的培养基是DMEM/F12，加的血清是新生牛血清，不是胎牛血清，这对细胞生长影响大吗？

luoziwei

新生牛血清肯定没有胎牛的好。

shizhu198511

, x% o8 |& H0 s9 ?. J5 v: k6 }7 i" y" H4 M6 `) G
回复 hyf198675 的帖子4 a; ^) C8 b' b! {  j
, ^& C4 [9 d  a( K- I& z
1.血清的问题我看到文献大部分是胎牛血清，自己用的是澳洲源的Gibco，新生牛的没试验过，, N3 R0 C- s, m& e/ Y: M% z
2.细胞密度的问题，密度低话也长不起来  X+ H/ t; |  s; Y. t1 d
3.没及时换液的问题
( }( k9 [6 b8 \5 M5 Y& z4.可能支原体污染的问题( O( w- f* t1 j! f
5.其它1 G7 K3 g( P+ U2 m5 ?

, V1 R0 V: r& s) A5 n6 `0 n. z  J只能想到这些了！' V0 d, V. s7 |5 G7 u" B5 c
6 V( ?- \. \# Y  {2 K1 `
楼主传点图片上来看看！

冰枫de梦

胎牛血清和新生牛血清的差别没那么大吧，我们实验室两种都定过，没用出来有什么差别。

xiaolong

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' {8 e; g( S) i; N: w/ o& b7 R' J
问下楼主，你用的什么酶进行消化的，消化的时间多少？消化时间不能太长，太长对细胞损害大，细胞密度小肯定很难长起来的

Demon_CN

消化养细胞的话长细胞比较快，大概6-7天就有细胞出现。
3 t# @4 Y4 x' S4 O: V但是消化时间比较难掌握。; ]5 p* H7 n+ w. \' o) P
首先要确定，你是否过度消化了，
3 t3 Q. G* ^( s4 I3 v& n' R; F; C2 \再确定你的培养条件，
) R5 ]* j. _, d: }4 D然后、根据你已经有点细胞爬出来，我想问下你隔多久换的液
) z# G3 a: O: I( y  e建议你把你细胞的状态发出来看看
; y7 d; W' H1 D* G+ T4 O. Z说下它的形态，消化下来的细胞贴壁状态，有点长出的细胞形态

hyf198675

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( B/ D0 O3 W" t6 P7 B( k% Q
9 G8 n, _" ^# w+ [我是用0.1%二型胶原酶消化4小时，用PBS离心后再用2.5%胰蛋白酶消化30分钟

hyf198675

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, Z3 L$ F7 Q; c: P$ o! I
! G/ c# l: g8 W% r谢谢

hyf198675

回复 Demon_CN 的帖子" s% T7 U  P6 ]4 y2 H8 d
' d& O) {, Q/ m# E+ Z0 i5 L+ J
我是用0.1%二型胶原酶消化4小时，用PBS离心后再用2.5%胰蛋白酶消化30分钟，也是在这论坛里看到的；我到第八天时完全换液一次，中间是加培养基。不是说细胞不多，培养基颜色没改变不用换液吗？还有怎么判断过度消化？看细胞状态是拍了照片直接上传吗？多谢！

hyf198675

回复 冰枫de梦 的帖子, p  [9 M/ Y9 `0 _- p

4 s0 h( w. [( Q& N1 Z  @1 ^$ `/ P+ n那你们新生牛血清浓度是多少？多谢