质粒转染遇到的问题

daviddow

我的质粒转染使用lipo2000,带有GFP，在24小时还有绿色荧光，可是G418筛选了几天后，GFP没有了., J, L# F' S- |6 E& W  y$ J9 Y" _
大家遇到过这种事情吗？怎么解决？谢谢

b6122

提高细胞的密度，这样稳定转染的几率大一些。G418不要一下子用得很高。你需要先测试最低致死的G418用量。比如在24孔板放入不同浓度的G418，每3天换一次液，2周之后看哪些浓度下，细胞全部死了，然后用其中最低的浓度处理转染细胞。$ ]! F5 H5 f+ q( X' f
另外转染的时候多做一些。他们有人认为多转染几次可以提高效率，不过我没有试过。

lxm5668

我当时做RNAi质粒转染时也带GFP标签，后来发现也看不到荧光了，但是没有影响克隆的筛选，蛋白干扰效果也很好，mRNA检测也很好。继续做吧！

zxcv12345

回复 daviddow 的帖子. l# O; a" i" e. _3 O2 f4 J6 J
- H) d1 a. h% r! D
这个？ 没看明白
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" t: G$ z/ J* k% e2 j+ [+ tG418筛选GFP？2 }7 I8 m; x. S" u% T7 @
+ @, J/ k% y) P$ B  x. F1 ]  O
你的转染肯定没问题的。转染后大部分都是瞬间表达，时间长了消失很正常，5 A4 R6 v7 `' j
只有少部分会插入基因组的，你要筛的是这部分

daviddow

谢谢各位对我试验的指导，谢谢啦

sdjjfangfang

回复 daviddow 的帖子  Z! H( C6 _1 }% v: F
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质粒转染，不同与病毒转染，在转染之后GFP会掉一些是很正常的，如果想要稳定表达GFP的细胞，可以考虑用病毒转染。