脐带间充质细胞传代问题

henryjia

8 }' h. [: Y; s  y
  f6 s( C1 q# g
我的脐带间充质细胞似乎P0传代消化有问题。但是一旦到T75培养瓶后似乎就消化的很快了。不知道大家是否有同样问题？

445334587

原代细胞长得比较密，细胞之间的间隙太小，用胰酶消化时无法充分接触细胞，故消化时间要长一些，而传代细胞之间的间隙比较大，所以相对好消化一些，还有你的细胞长的太满了，80%就可以传代了。

kingyou117

是的，这个跟代次是有关的，一般P1→P2酶消化时间偏长大概在2分钟左右，到P2→P3时大概就在一分钟一下！应该是跟细胞的活性有关！

上官冰梦

回复 henryjia 的帖子
" ]( C; j  U9 e7 P/ o' |& F$ y  Y' {( V0 T. }2 O
我的也是消化时间特别短基本上加上胰酶就能下来了，但是问题不大，酶对细胞作用时间短反而不会伤害细胞。我想问你一下 你都是让细胞长到这么满才传代吗？
0 G: \7 @' j" \5 {. D2 `6 R

maozhuxiwo1

回复 nankou2008 的帖子
6 f8 b- ]+ `! a. y2 {$ P: B- b* L
有可能是血清的问题吧，请问你们用的是哪家的啊？* \$ d5 k( V  b
MSC对血清要求也很高
, K+ X6 e. o! Y9 s& j4 n

帝国黑骑士

这个消化时间，第一可能是你的心理作用，第二p0代细胞消化的时候和p1代细胞消化是不一样的，p0代细胞少而且纯度不高，所以消化后观察细胞回缩不明显感觉不是很好消化，p1代之后细胞出度高消化观察明显！这和瓶子是没有什么关系的！

yanwu_1

其实，细胞在高密度下，由于传代导致的分化或表型变化，以及细胞密度过大导致的接触抑制，都可能是消化时间变短，细胞的敏感性增加。

欣雨1121

消化时间有些长了吧   我的P0代细小形态要比这好些啊

toncv

你好楼主，我也在做相关的实验。你可以分享下你分离培养脐带间充质干细胞的方法吗？  我们用的淋巴细胞分离液分离，STEM CELL的培养基培养，感觉形态没你的好

tanrufu

消化时间长短应该跟你所用的消化的胰酶的酶效和细胞生长密度有很大关系吧，应该与培养材料不存在大的关系。看你的图片，细胞状态很好啊。还有就是P0代细胞培养中本身就含杂比较多，往下传细胞相对纯化得多。你说得这种情况应该是正常现象吧