关于MEF制备的小疑问

ligangtiancai

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4 I+ i7 a. c6 F$ f/ \! E我的经验是：8 c2 a- I+ ]9 l
    去掉四肢、头、内脏和尾巴，将躯干转移至新的培养皿中，加入几滴胰酶，剪切20~30下，然后转入T75 Flask中，按照每个胚胎1ml的量加入胰酶，适度吹打后直立放入37度孵箱消化5分钟，取出后充分吹打后加入MEF培养基终止，按照每个T75瓶2-3个胚胎分装。3~4天后按照1:3传代

ligangtiancai

回复 your1024 的帖子; \% v7 @! n& d* d+ j3 Z2 q  H% m
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1.剪碎后一点点的用滴管转移到T75中，然后按照每个胚胎1ml去补加胰酶（前面剪切的时候只加1~2滴的胰酶）
# \# V/ Q" [4 O' Q: {6 b2.放入37度孵箱5min消化，注意T75瓶子要直立。/ Z0 {! K) T8 ]! Q4 }7 f, M
3. 5min后取出，吹打20~30下
* O# o! E# y% ]0 x3 F) i4. 加MEF培养基终止，适度吹打，分装。
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每个T75加13~15ml培养基
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7 k6 S. S  N& i2 o5 S1 S6 ]铺feeder前需要计数，按照3万/cm2（CF-1）或6万/cm2（C57）去铺