胚胎干细胞转染外源基因，用什么系统比较好？

bigsnow55

请教大家，向mES和hES中转染外源基因，用什么转染系统比较好，慢病毒，逆转录病毒，还是普通质粒？
) B. F- [% ]0 c8 }谢谢！

sdjjfangfang

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& o, X. V# T) q1 g" i转染系统要根据你的实验设计及现有的体系来定。如果是看长期效果，则最好选用慢病毒，如果是短期效果则最后选用逆转录病毒的效果更明显些。普通质粒转染完成后既可以看长期效果，也可以看短期效果，这要看你的载体是否有标签了，包括GFP或者是药物筛选标记。本人觉得，三种方法中逆转录病毒的转染效率可能会更高些。不论是对哪种方法，向hESC中的转染都会困难些。

xan36

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7 n! |8 a$ H5 r" x  K6 n
请问，你是用来诱导造血细胞吗？那HOXB4的vector是什么呢？Migr1载体吗？
, G/ H: U/ \& z, D- z1 c/ r谢谢！

qq007www

我是用质粒核转的，想过不错

elvacxx

追求高效还是Lenti吧

细胞海洋

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# n, r- H+ c. j$ g4 d
) o5 v) h" z9 d& J$ {- W建议你发新帖提问

hynew

回复 wwy551 的帖子/ v/ @- n! ]+ w# r8 D* d  v

! W& C* ~5 q, V+ N. ]2 l6 }您好，您说在hES中用PLL3.7构建含目的cDNA的慢病毒表达载体，转染hES稳定表达HoxB4-GFP，具体是怎么改造的载体，是否将U6 换成了EF1a promoter？谢谢！能否帮我问问原来改造的人？不胜感激！

细胞海洋

回复 bigsnow55 的帖子4 p. k# v1 w+ x8 w5 Q
- R6 }0 I4 Z( J2 D: n7 v: S2 s
看14楼

chutu

pLL3.7确实是一个表达RNAi片段的载体，用的是U6 promoter，不适合表达蛋白基因。楼上所说可能是自己改造过了这个载体，比如把promoter换成CMV之类的

bigsnow55

# r/ m, ]3 t( [7 k& J  |6 g$ `0 a+ z+ |% ~9 r
回复 wwy551 的帖子/ ?& r# i5 b' a- k
7 o7 I: `8 ~$ E
我想用PLL3.7构建含目的cDNA的慢病毒表达载体，转染hES。但听一个香港的朋友说：pLL3.7 lentiviral system only allows shRNA expression and not cDNA. 请问这是真的吗？