求助：Yamanaka factors

franklinhg

如题，由于现有的质粒都是别人给的，拿回来后也没有验证过。 小弟做小鼠的iPS两次了，结果都没有克隆出现。现在老板催的急，再做不出来的话，估计要直接走人了。 恳请大家帮助小弟一把，能否给予这些质粒一点？十分感谢！

frankieisme

你现在在哪?还有你SNL细胞以及MEF细胞状况如何?MEF细胞最好不要超过第3代.还有病毒包装的情况?比如293细胞\包装质粒\转染方法?

frankieisme

要有耐心,一般需要2周到3周才能见到克隆的.

Yedan

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" {9 }$ |+ u" ^
& F7 i. x  ?3 U. ]6 C在上海么？你是用的经典的pMX质粒做的？参照06年Yamanaka他们那套么？麻烦问详细点

yyshpy

你好像对这方面了解的挺少的，多了解一点吧，也极有可能是你做法的问题，多看看文献，和做过的人交流一下，应该是能做出来的，而且现在改进的方法也很多了，可以看看，借鉴一下

meister

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2 ?- n8 R8 v! `1 N$ t- F2 i+ o" t: z
先验证， 再求助。
2 c# ^5 X: G0 J' ?: v别人再给你的也也不一定对。
" y& d. m. {. z( @: r6 a% w" c验证是必须的

franklinhg

回复 Yedan 的帖子7 `$ Y, b6 Q9 T

7 t2 o& u  Q0 ~9 m/ q: o是的  就是06年的Yamanaka的那一套系统

franklinhg

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& f4 b; j5 v% J& X
4 F" U* j1 v) t  S  R现在是我和这边做过的人交流  请教了  但是老板不愿意用其他系统的  只用Yamanaka  06年的  不愿意花钱  

franklinhg

回复 meister 的帖子3 v+ d/ c/ g) r3 y2 }( B8 ^
7 P9 B9 {3 ?  m; u1 p4 X1 _
这个只要做过分子克隆等的都清楚，最主要是现在这个老板是临床的 然后分子这些根本就是七窍通了六窍-----一窍不通。 但是还要瞎指挥，乱安排。。。结果，什么课题实验在他眼里都是很easy的。而且还不希望自己重复，说是浪费钱。就差把我气的吐血了。

franklinhg

回复 Yedan 的帖子. g8 [* O4 F7 S) B! Z" @2 z
) X( N* M$ [. F8 F3 T
不好意思 我不在上海  现在在深圳。