【请教】外周血分单核细胞培养DCs的详细步骤

wagumaxida

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主要有几个问题亟待解决7 M7 j) J. ?% q% f+ }6 V9 P/ F
1.外周血分淋巴细胞时，梯度离心去除血小板时，离心梯度是怎么设置的？
, w3 }. R4 U0 ^& c2.淋巴细胞贴壁获得单核细胞时：
+ \2 v, M6 X& L( F7 y/ R  A.贴壁时需要加血请吗？需要加细胞因子吗，需要的话加哪些，量是多少？
+ E0 m' i3 Z/ }* l  B.贴壁时间是多长时间，2h还是48h？
! b- x$ R! \+ [; U: q9 }  j0 C  C.贴壁时是在培养瓶中好还是在六孔板里好？
$ d: f& z2 z' h# h  D.这一步还有什么要注意的吗？
$ j: P! u+ X9 C$ x0 M' O1 {3.单核细胞诱导培养成未成熟DCs这一步：7 G& }8 ~. N5 t8 Q0 Z
  A.换液间隔怎样？半量换液还是什么其他方式？
+ P2 O  z& P, O+ P- a9 p, u4 r  B.换液时所用培养液中因子的量是多少？
8 ?; J4 {0 D2 \% w3 W* }2 U& {2 s4.未成熟DCs诱导成为成熟DCs这一步：- _7 d8 F$ o0 E' u
  A.在第几天开始诱导？
& ~0 @# ^7 U) o! Z* n5 A- K  B.用什么因子或者药物进行诱导，量是多少？$ S+ `% `0 V. A" S+ d2 n' c1 e/ I1 C
  C.诱导时还要继续添加GM-CSF、IL-4之类的吗？
2 f4 Z& K. q; Q3 D# k  D.诱导多长时间可以收获？
' D/ ^! H- w6 x9 \, HP.S. 如果要用荧光腺病毒感染的话，在第几天哪个阶段感染会比较好？2 W0 l. s- y3 [$ c1 r* i# e. ?
8 m/ D8 E& J1 E) s# H, R7 H, L
非常感谢！

wagumaxida

大少爷 发表于 2012-5-18 22:16 7 b$ A5 a5 b& e3 ?6 G9 C
1.我们用久保田的离心机，第一次1500rpm（大概400g），10min，第二次1200rpm，10min，第三次1000 rpm，10mi ...

+ y, j2 H, I+ m. K" t0 ^, ^感谢 另外收获后的维持培养也需要加细胞因子吗？ 需要加什么