请教小鼠BMSC问题，困惑中

camus

本人用的全骨髓培养法来提取小鼠的BMSC，小鼠是BALB/C，6到8周龄，雄性。) G* n5 p1 Y6 x' V- i/ H  I; A
方法步骤如下：
# w' M) ^" E; }* Z0 O4 E2 ~无菌条件下取出小鼠股骨跟胫骨
) g, p; r' K# R, A/ O" i用1ML的针管用LG-DMEM进行冲洗
% A7 [# K- S0 H3 ?; p! Z/ X冲洗液过200目的筛子
0 m9 i* y7 \1 b9 d0 D4 E3 A. C2 V) Q然后将冲洗液离心
) x' i' A" N+ v4 q9 {PBS冲洗两次，1000R/MIN，5分钟  H% D' r0 w5 }" g
用10%FBS，1%双抗，89%LG-DMEM培养液重悬，计数
0 ~5 f9 U, J5 K# C; G调细胞浓度至1*10^6接种到小培养瓶中1 Q# f2 w( v( R' T) f5 k
; T1 O, O3 i+ ^' z" Q2 J% {# z
整个过程大概在三个小时左右
* e/ Z, G9 i9 q0 a. d' w以上是提取方法，不知道哪里有不足，请指出8 O7 }+ M; M! l  Z. g; ~& Y, @) S4 q
% o! ~1 @+ ^0 e  _, U
现在已经48小时了，细胞什么形态的都有，但是就是没有贴壁细胞，请问是否要进行半换液，另外请哪位大大把你们养的好的细胞的图片发来看看可以吗？小弟学习一下，万分感谢！

camus

另外，为什么我提取出来的细胞在离心后，红色较明显，是不是红细胞太多，是否需要在用PBS冲洗的时候，加一次红细胞裂解液破红？

luoziwei

48小时还不贴壁？估计MSC少吧，重新做一次

camus

回复 luoziwei 的帖子7 K' Z2 Y" e+ s  \+ t
8 u1 v4 C+ T1 _# @0 |
说错了，14个小时不贴壁，是不是小鼠的贴壁慢？上次师姐用了两只病鼠都12小时贴壁了，也是小鼠。。。。为什么 。。。

luoziwei

回复 camus 的帖子! O& g6 H$ x' h' w
6 Q' c) N) H7 _! ]/ \. U
那再观察一下。也许能贴

muyuan

整个过程大概在三个小时左右: + q3 \/ c, N% G) z, S+ R
时间是否有点长，影响细胞状态？

wuyannini

时间太长影响了细胞活性
! p6 b0 |& u+ ?8 n5 z& n( c7 [0 C$ t另外，你调整的细胞是10^6，是不是所有的细胞加在一起的数量啊，如果是这样的话，应该是其中的干细胞数量不够。  ]' I0 L% d# `/ {$ E
还有，14小时你不换液怎么会看到干细胞形态啊，即使看到了，应该看到的也是漂浮的细胞吧

xinxinxinliu

回复 camus 的帖子% A: ~' b4 ^2 D- @9 r0 p

& _& z1 [" B' X. D- Q是要用红细胞裂解液将红细胞破坏掉
/ L: |6 t, Z/ x" m

camus

回复 luoziwei 的帖子
; ^8 r4 S8 e! X3 a* ~
& Z# v2 W/ W& b; N谢谢，已经贴壁了，有空上图，请鉴定一下

camus

回复 muyuan 的帖子4 H0 Q& V  D$ j& d/ P
2 N; P5 Z1 a  f7 Z" x
那请问多少时间做完这个流程比较合适？谢谢解答~