请教小鼠BMSC问题，困惑中

camus

本人用的全骨髓培养法来提取小鼠的BMSC，小鼠是BALB/C，6到8周龄，雄性。2 p$ Q& e# G8 ^5 D# }" g# z- c
方法步骤如下：
4 v$ o4 M5 B3 b无菌条件下取出小鼠股骨跟胫骨+ e% B. k6 X) y1 x7 M* I
用1ML的针管用LG-DMEM进行冲洗
( E4 u2 o1 l$ z& d冲洗液过200目的筛子+ U- i7 V+ E  m" V9 h/ U
然后将冲洗液离心
+ u& X* |0 q) IPBS冲洗两次，1000R/MIN，5分钟
, M8 h% ]1 E8 U& G用10%FBS，1%双抗，89%LG-DMEM培养液重悬，计数
4 g& ?8 o+ ?& Y/ Y) N调细胞浓度至1*10^6接种到小培养瓶中
9 n8 X; b, e; [8 h8 `" b% D
* q1 ?4 q9 \5 A7 g1 r' r8 {整个过程大概在三个小时左右
6 y: `' G3 m8 i以上是提取方法，不知道哪里有不足，请指出* U! x& E1 W) S# C

6 S" }6 G! P6 O& p8 E现在已经48小时了，细胞什么形态的都有，但是就是没有贴壁细胞，请问是否要进行半换液，另外请哪位大大把你们养的好的细胞的图片发来看看可以吗？小弟学习一下，万分感谢！

camus

另外，为什么我提取出来的细胞在离心后，红色较明显，是不是红细胞太多，是否需要在用PBS冲洗的时候，加一次红细胞裂解液破红？

camus

回复 luoziwei 的帖子
# z- d% B1 l) X$ Q" D; J  f- m' l# t  z2 \8 b
说错了，14个小时不贴壁，是不是小鼠的贴壁慢？上次师姐用了两只病鼠都12小时贴壁了，也是小鼠。。。。为什么 。。。

camus

回复 luoziwei 的帖子
7 y3 s3 e$ X5 k. F/ S4 R! {& d+ c' V) ?$ q( X2 j
谢谢，已经贴壁了，有空上图，请鉴定一下

camus

回复 muyuan 的帖子
: R& l/ ]: i  P2 {
$ i* I( T5 l+ @3 F( o那请问多少时间做完这个流程比较合适？谢谢解答~

camus

回复 xinxinxinliu 的帖子5 s- W- [/ v/ t/ ~) b- ^  Q7 a
4 C/ X) U. O0 f& Q, p; N- _
谢谢，下次买一个红细胞裂解液7 P8 z7 P& p% Z0 P9 j* F