请教小鼠BMSC问题，困惑中

camus

本人用的全骨髓培养法来提取小鼠的BMSC，小鼠是BALB/C，6到8周龄，雄性。: Q8 D1 l8 a1 T& a0 h  d' a' ]
方法步骤如下：
# p2 K# j2 W6 _$ J无菌条件下取出小鼠股骨跟胫骨4 D6 h/ l+ l) B/ w7 l3 U
用1ML的针管用LG-DMEM进行冲洗
6 b5 Q. l* P$ u9 ^% [0 ]! x冲洗液过200目的筛子
5 R1 }% `( P4 Q- c0 i% V然后将冲洗液离心
* L' N% A/ j7 j' aPBS冲洗两次，1000R/MIN，5分钟& k. L* K, Q; e: b3 m/ I
用10%FBS，1%双抗，89%LG-DMEM培养液重悬，计数
0 V) [7 f4 ]$ w# [( M调细胞浓度至1*10^6接种到小培养瓶中
8 b; H3 Q7 v3 d
, O! T; r( l" V) F- D: N整个过程大概在三个小时左右
- h; X$ o. H) O" f以上是提取方法，不知道哪里有不足，请指出# ^( o+ j  V9 z: q$ S4 {

& i! o4 \$ \5 J现在已经48小时了，细胞什么形态的都有，但是就是没有贴壁细胞，请问是否要进行半换液，另外请哪位大大把你们养的好的细胞的图片发来看看可以吗？小弟学习一下，万分感谢！

camus

另外，为什么我提取出来的细胞在离心后，红色较明显，是不是红细胞太多，是否需要在用PBS冲洗的时候，加一次红细胞裂解液破红？

camus

回复 luoziwei 的帖子
4 T" K  b% [0 {9 i0 R& h1 m; v" l$ }' x0 ^6 [) b' g
说错了，14个小时不贴壁，是不是小鼠的贴壁慢？上次师姐用了两只病鼠都12小时贴壁了，也是小鼠。。。。为什么 。。。

camus

回复 luoziwei 的帖子
& [" f$ f$ C( R9 G0 Y: b! y* M" f( L$ o# T
谢谢，已经贴壁了，有空上图，请鉴定一下

camus

回复 muyuan 的帖子
4 y* y8 t; f4 B/ @1 a( \1 x: M0 [
1 U) w$ R2 n- I& C那请问多少时间做完这个流程比较合适？谢谢解答~

camus

回复 xinxinxinliu 的帖子
- C! `0 d; w7 |# {: Y! b0 R, P6 s  W
谢谢，下次买一个红细胞裂解液
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