请教小鼠BMSC问题，困惑中

camus

本人用的全骨髓培养法来提取小鼠的BMSC，小鼠是BALB/C，6到8周龄，雄性。; c" Y, Y9 V: y2 f  h
方法步骤如下：$ J8 _" r" A4 W4 _
无菌条件下取出小鼠股骨跟胫骨
, t6 c# g5 Q2 i4 x# M4 Q- F用1ML的针管用LG-DMEM进行冲洗9 [7 X6 p% M' T
冲洗液过200目的筛子& d& H# Z% y' u, a! F# [
然后将冲洗液离心8 m. y( u- W* ~: _$ o
PBS冲洗两次，1000R/MIN，5分钟3 f1 A0 f4 F+ [/ I
用10%FBS，1%双抗，89%LG-DMEM培养液重悬，计数
9 f" B' j- T6 G+ A调细胞浓度至1*10^6接种到小培养瓶中
6 w. B" {# t2 D' p5 C7 d: X6 u1 \5 S' _9 W
整个过程大概在三个小时左右6 u3 t; l1 g# ~/ M
以上是提取方法，不知道哪里有不足，请指出! E) S$ q3 B: ~5 G

! C" d% C6 E# y4 r! R' m; l: p& v" [现在已经48小时了，细胞什么形态的都有，但是就是没有贴壁细胞，请问是否要进行半换液，另外请哪位大大把你们养的好的细胞的图片发来看看可以吗？小弟学习一下，万分感谢！

camus

另外，为什么我提取出来的细胞在离心后，红色较明显，是不是红细胞太多，是否需要在用PBS冲洗的时候，加一次红细胞裂解液破红？

camus

回复 luoziwei 的帖子
% n" H* W( s0 m5 c
) r  j6 o& ?, e( p/ Z* Y说错了，14个小时不贴壁，是不是小鼠的贴壁慢？上次师姐用了两只病鼠都12小时贴壁了，也是小鼠。。。。为什么 。。。

camus

回复 luoziwei 的帖子! X+ C5 p5 X* H& S9 e

6 ~0 B: y) D7 U谢谢，已经贴壁了，有空上图，请鉴定一下

camus

回复 muyuan 的帖子
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0 G! {% H/ G% {. U1 j# L那请问多少时间做完这个流程比较合适？谢谢解答~

camus

回复 xinxinxinliu 的帖子
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# V. @* C/ E& S( U  W谢谢，下次买一个红细胞裂解液, w8 `) `3 D1 H& Y2 Y% L: b