建立脐带间充质干细胞库的几个问题

hwlightning

1、作为脐带干细胞种子应该采用第几代？（是不是P5代前的都行）/ l5 i/ l# y% u, k
2、冻存细胞所用的冻存液在临床上可不可以用DMSO，有没有可代替产品？右旋糖酐40有没有必要加?要用胎牛血清要吗？在临床上有没有影响？( y0 k, S3 X# O" R
3、培养细胞有没有无血清培养基？好像现在的无血清培养基养还是不成熟。要加血清的话是选用胎牛血清吗？浓度是多少？对回输人体有怎样的不良影响？
$ w# Z" q3 K# Y! u4、收集细胞是使用细胞刮刀还是用胰酶消化（有没有临床级别的）？
8 c3 T  V  h7 n7 \5、回输人体一个疗程是多少细胞（1~10x10*7个）?是用生理盐水重悬？总体积是多少？还需不需要加入其它东西如：人血白蛋白？
: P" z2 V, D/ b5 E$ d5 ]* {) X

zhujiang007

我相信你这些问题也是有关部门正在讨论的问题，否则也不会自查自纠了。关于很多数字，都不是绝对的，这要根据细胞实际生长状况和病人实际病情而定。比如传几代，无论传几代注射前都要经过核型分析等一系列检测，传一代不能说细胞就不会变异，传十代也不能说细胞就变异了，总的原则是用最短的时间获得需要量的细胞。再比如用多少细胞量，这更要根据患者的病情来定了，什么病，病情程度。自体血清肯定是最安全的，没有争议的，能用最好，其次是胎牛血清，也有很多人再用，目前没问题不等于以后没问题，这要看国家的政策了。细胞消化有很多种方法，胶原酶，透明质酸酶等，根据实际情况而用。

大少爷

1、作为脐带干细胞种子应该采用P1代或P2代。8 ~3 k$ ?8 }8 v+ z
2、冻存细胞所用的冻存液在临床上可以用DMSO，右旋糖酐40（冻存脐血用的）没有必要加。7 p2 N& [0 Q. _% }
4、收集细胞是用胰酶消化
2 s; d: N9 x. N4 W+ n! n! T) \5、回输人体一个疗程是多少细胞（1~5x10*7个较好）可以用生理盐水重悬总体积一般30ml，一般需要加入人血白蛋白。

hwlightning

回复 zhujiang007 的帖子
: b1 ]: O7 Y* U/ Z
* {& _, Z0 `* ?/ }5 ^你好，能不能具体跟我讲解下回输前的核型分析过程。医院可以做吗？
6 f5 _; l3 z$ v还有培养干细胞加自体血清养出来的细胞怎么样？如果用太牛血清，浓度时多少？不会引起免疫排斥？
4 ?3 q/ e  {0 \1 j如果用胰酶消化，回输前是不是要检测残留量？

hwlightning

回复 大少爷 的帖子5 ~; m8 H$ ?. J% f
3 Y8 j& D+ T# L( u) x
少爷，看了你好多帖子
5 W' x; O/ @) n6 t9 ?能给个联系方式不？呵呵
8 S% E+ }) r8 }0 d0 D9 ~; G' m胰酶消化用多少浓度啊？; r  }* `2 d! R+ V/ u% v  Z3 J7 h
知道回输前要做些什么方面的检测啊！微生物、细胞表型还有哪些？
2 K2 i8 V" K& O+ i: V6 }谢谢

hwlightning

再问一下：用细胞刮刀收集细胞可不可以？为什么？

大少爷

联系方式就算了。& ]0 h3 O) y2 ?& {6 w4 Y- @( }
' F+ f! S* ~& c7 z- _& l0 k1 A- z
消化：0.025%胰蛋白酶+0.02%EDTA（用时与培养基等倍稀释后再添加）
) m( N% K: u6 V  q
( M; p7 Z8 q# _% Z. T, g# v. N回输前检测细菌内毒素，革兰氏染色。流式检测是必须的。6 Y2 W' {0 T- g, Y1 D

8 U$ a2 e* h; K8 ~' _+ y4 Q' q- e: E细胞刮刀对细胞损伤太大，不建议使用

menghy

细胞代次当然是越早越好，每次都应该检测相应的表面标志，无菌实验等。9 L5 I3 @0 }. t
核型分析就是染色体分析，这个要看你们医院具备这样的条件，能做就可以做了。$ r1 R  F" m) F" z  {
无菌实验，表型分析就是验证干细胞阳性表达和阴性表达的表型表面标记。0 x" V( [$ |' f% P  V/ Z& B' ^

hwlightning

回复 zhujiang007 的帖子
0 Y) z' w3 r. K7 W' U/ m- g. d0 {; L/ v) w% U  o
请问下我在培养基中加入硫酸庆大霉素对培养脐带间充质干细胞有没有影响

hwlightning

回复 大少爷 的帖子
) r: T6 S' G/ A5 f! [1 @% F8 U( d
& x9 ?1 f) y5 t请问下我在培养基中加入硫酸庆大霉素（160U/ml）对培养脐带间充质干细胞有没有影响？) U0 c; N6 D' X7 x* T! W
我取脐带的时候的生理盐水中也加了硫酸庆大霉素，总感觉用组织贴壁法细胞爬出来好慢，也不多。* {. f3 z; J9 N