关于流式筛选肿瘤干细胞抗体选择和比例及阳性率的问题，

sararain

真心向各位请教下，我是养的肿瘤细胞，准备做流式来筛选CD90阳性的细胞，然后用的是BD公司的APC鼠抗人CD90抗体，今天做流式筛选CD90阳性细胞时，发现一个都没有，觉得是抗体加的少了，请问你们加抗体和细胞液的比例是多少？谢谢

细胞海洋

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shixiangguang

你好两位请问肿瘤干细胞可以建立细胞系吗？

sararain

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恩，谢谢~~~~

dahui

不能简单的问比例是多少，因为不同规格的抗体推荐的使用量是不一样，现在的抗体一般都是有两个方法来给出推荐量，test和ug。有的包装是25tests、有的是25ug、有的是50tests、有的是50ug，等等，所以您要看包装说明，另外，您还要考虑抗体的克隆批次，也是有区别的，严格的讲，每次新抗体到货后，都要自己先做预实验来摸索的，一方面可以为了达到最佳的染色效果，另一方面也是为了给你节约试验成本，因为一般的实际使用次数都会大于厂商推荐的次数。但是细胞一般建议控制在10E5~10E8之间，我们一般是在10E6。染色体系是100ul。但是你用于分选，所以还是要根据你的具体情况来调整。  n9 w& L0 Z  z9 J

# a$ W9 K6 y% B6 b' y7 R  _另外关于抗体，不一定大公司的抗体就好用，你可以向实验室使用过的人请教，这个marker用那个公司的较好，比如说ebioscience的抗体，我们就一直用，但是有的也会用BD，或者biolegend、等等。
  d$ x5 _3 Y# I$ b  S' y1 Twww.ebioscience.com，国内的代理很多，我们用的莱兹生物。* t8 v- K; ?; I/ m

6 N) r* k( j2 R+ }5 Z) v希望对您有用，有问题可以留言。或者顶贴。