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sararain

新手上路

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楼主

发表于 2012-5-26 22:43 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

真心向各位请教下，我是养的肿瘤细胞，准备做流式来筛选CD90阳性的细胞，然后用的是BD公司的APC鼠抗人CD90抗体，今天做流式筛选CD90阳性细胞时，发现一个都没有，觉得是抗体加的少了，请问你们加抗体和细胞液的比例是多少？谢谢

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dahui

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沙发

发表于 2012-5-26 23:57 |只看该作者

不能简单的问比例是多少，因为不同规格的抗体推荐的使用量是不一样，现在的抗体一般都是有两个方法来给出推荐量，test和ug。有的包装是25tests、有的是25ug、有的是50tests、有的是50ug，等等，所以您要看包装说明，另外，您还要考虑抗体的克隆批次，也是有区别的，严格的讲，每次新抗体到货后，都要自己先做预实验来摸索的，一方面可以为了达到最佳的染色效果，另一方面也是为了给你节约试验成本，因为一般的实际使用次数都会大于厂商推荐的次数。但是细胞一般建议控制在10E5~10E8之间，我们一般是在10E6。染色体系是100ul。但是你用于分选，所以还是要根据你的具体情况来调整。% |3 b$ z2 G+ p; n, ]

另外关于抗体，不一定大公司的抗体就好用，你可以向实验室使用过的人请教，这个marker用那个公司的较好，比如说ebioscience的抗体，我们就一直用，但是有的也会用BD，或者biolegend、等等。
www.ebioscience.com，国内的代理很多，我们用的莱兹生物。0 O* J1 h0 A4 h! [: p3 Y/ q
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