关于人和大鼠的骨髓间充质干细胞培养液里添加b-FGF的问题

dimi_luki

小硕一枚，今年研一，刚进实验室三个多月，一开始养的是大鼠的骨髓间充质干细胞，分离后用全细胞贴壁法，培养液是含10%FBS的DMEM/F12，之后细胞状态也不错，第二代时细胞如下图
: \+ J' r, L$ F3 q, n+ F' Y& ^
) l/ f$ H. Z2 C/ y8 w: e到第三代时细胞形态如下图
% Z; _# y3 m  d. M7 c% e2 a
6 u, L& `) J: ?) N" q% d6 y" i长满之后成旋涡状，如下图
3 u+ m2 v  g8 f0 K8 w( S! N: o7 ]+ [5 @
" {4 x& q; U) z8 E/ h1 u) r7 J
看似形态还不错，细胞增殖速度也挺快的，也长成了旋涡状了，一直沾沾自喜。但是最近去别的实验室领回一皿人的骨髓间充质干细胞后发现他们的细胞长的立体感很强，细胞也很细长，如下图
% K) L: @8 e$ ]% Q7 i3 v
; M% J3 o2 e% U& v1 Y但是回来后因为我们没有他们的培养液，他们是杭州一家公司买的2000多一瓶的人类间充质干细胞条件培养液，是用血清替代物的，我还是用DMEM/F12培养基，只是胎牛血清换成了MSC FBS（澳洲产），换完液后细胞变的更细长，估计是开始的时候还没耐受环境的突然变化，之后细胞就开始变宽了。如下图，这才是换液后三天左右的时间，细胞就成这样了。。。  Z! T9 v$ D: R' q! R
$ f3 q1 c& M1 j" E7 `: m

( o+ b9 w" Q9 b* p2 U# ?之前拿回人的间充质干细胞时，那边老师确实也说换成DMEM类培养液的话细胞会变大变宽。我在想，如果我一开始有加入4ng/ml的b-FGF会好点么？
- p3 Q$ r. M  f5 D0 |% L  R2 S还有就是有朋友在做大鼠的骨髓间充质干细胞的时候加b-FGF么？细胞是不是会因为b-FGF而比较细长？3 o, e4 U. ^0 \9 S3 |/ q+ z
2 O. \# d# J; c6 M4 ?& @
其实简单的问就是如何让细胞形态更好，是哪种物质决定的？确实是b-FGF还是血清替代物还是其他什么的东西。。。谢谢哪位大侠解答下。。& N2 w, h& w) q7 O' p! N: ^* B
( t# [5 Y/ L8 z' A5 u+ v! y
+ g/ P( |3 n& P% b' J5 C9 r5 o

3 U4 [6 n- t2 y2 f, F. l

溜圆

回复 dimi_luki 的帖子
! U8 v, M* s. v5 y3 x' D, T7 y* ]5 F. q- }
医院的什么科室会做这个细胞啊？我没有听说过。我在长沙，请问楼主在哪个城市啊？

hhxxattxs123

回复 dimi_luki 的帖子9 ~9 Y' ~( q7 l
. K' q1 Z  Q: H" E. A) f) @
b-fgf 存在的问题和临床应用前景
6 h! S$ H% m; C5 a6 w& ubFGF是一种促细胞分裂的肝素结合蛋白，可诱导多种细胞的增殖与分化，对神经系统有重要作用。在不同种间bFGF结构的高度守恒性，提示它在个体发育中起着原始的促进作用。鉴于以往bFGF的研究多集中于中枢神经系统，在周围神经损伤后，bFGFmRNA的表达情况、bFGF受体表达的细胞、bFGF如何与受体识别以及结合后的变化?bFGF促周围神经再生的机制，生理状态下存在多种生长因子，它们的相互协调作用以及调节关系怎样?等，这些问题的阐明将为临床提高周围神经损伤后的修复效果提供理论依据。此外，由于bFGF易被酶分解，其在体内作用的发挥需持续长时间与靶细胞受体结合，如研究一种既能让bFGF稳定不受蛋白酶降解，又能使bFGF持久缓慢释放的载体，则解决了bFGF临床的一大难题。虽然bFGF在体内含量甚微，但分布广泛，生理功能复杂多样。bFGF生物活性的多效性以及神经营养的广谱性，为其从基础走向临床提供了保证，bFGF对于神经损伤再生的研究，是对于神经损伤治疗领域的一个新的探索和拓宽，目前在动物实验上已现成效。

hhxxattxs123

回复 dimi_luki 的帖子4 U( K' i2 i+ C: \* w
8 D8 D! q9 G5 B; ^: l2 n
最近我们换用了澳洲血清和低糖DMEM（GIBCO）细胞生长的状态挺好了，长的也快，自己配制低糖DMEM，里面带有缓冲物质，这样即使细胞液用时间有点长，也不至于造成PH的严重变化，对细胞的生长创造了好的环境，这都是本人养了好长时间血的教训，

hhxxattxs123

回复 dimi_luki 的帖子9 E" f% D! S: Q' p2 w" w% W

. j2 J( j  o+ ^& [) s9 b你养的细胞状态已经很好了，我们养的细胞，状态不是很好，长的也慢，我在养的时候，发现一个问题，变紫色的培养液严重影响细胞的状态啊，特别是细胞数量少的时候，有时候会死掉大部分，剩下的下拨也不怎么生长了，要是细胞数量多的时候，情况还好一点，

dimi_luki

6 f/ o' N% [. w& F$ p

溜圆 发表于 2012-6-14 13:02 * X/ K8 a0 r$ S& x: X2 A1 F+ c8 |
楼主能问下你的联系方式么？我下一步实验需要人的，能分我一瓶人的骨髓间充质干细胞么？我有大鼠的，可以交 ...

# A* Q$ Y1 J. G" ]- H) K, ~7 h& V! K8 V" L6 S) z0 _
我的人骨髓间充质干细胞也是老板联系后，去其他医院拿的。。。大鼠的我也做的，我自己分离的，养的不错。。。人的貌似一般只能通过医院，问问你老板，能不能联系到哪个医院做人的间充质干细胞的，问问他们能不能分一皿，大不了塞点钱啊。。我老板就是这么帮我弄到的。。

溜圆

楼主能问下你的联系方式么？我下一步实验需要人的，能分我一瓶人的骨髓间充质干细胞么？我有大鼠的，可以交换，长得还不错。邮箱：liuyuan198735@163.com

wind789

dimi_luki 发表于 2012-6-7 20:56
. ]; x& g! v, t你也是用杭州百通的培养基吗？现在报价多少，上次去二军大的时候那边老师说2000多一瓶，500ml，但是现在问 ...

! D* e& l: U# g" i' A: c- T
我用过这个培养基。报价是3000多，具体拿价多少不清楚哦。

dimi_luki

huangcong1988 发表于 2012-6-8 08:33
) H+ w, x5 ]4 w7 n8 {回复 dimi_luki 的帖子
9 s4 [5 F* y/ K/ o7 |2 j! T, W  w+ f/ i( h
哦，不是一公司的，protech的50ug，1000多，1500左右

' W0 `, t5 t5 |8 @好的。。非常感谢。。

huangcong1988

回复 dimi_luki 的帖子0 p) G8 N- m2 J8 f$ `" `8 b) l
5 T% c& n" ~& K$ U& [  n! h. M' h
哦，不是一公司的，protech的50ug，1000多，1500左右