关于人和大鼠的骨髓间充质干细胞培养液里添加b-FGF的问题

dimi_luki

小硕一枚，今年研一，刚进实验室三个多月，一开始养的是大鼠的骨髓间充质干细胞，分离后用全细胞贴壁法，培养液是含10%FBS的DMEM/F12，之后细胞状态也不错，第二代时细胞如下图
' O$ J$ a& {4 o2 i6 i: {* h- M+ S# [" U0 m& t+ u8 Y- f
到第三代时细胞形态如下图1 r) u! T) }9 Q( M! M! I# Y

) s) H" ~- N2 e! h长满之后成旋涡状，如下图3 I8 F% z& t( i* X+ c' C

' @3 K! T2 u' i, ^* L" M8 k" {7 o2 k  l% \9 D" u& W
看似形态还不错，细胞增殖速度也挺快的，也长成了旋涡状了，一直沾沾自喜。但是最近去别的实验室领回一皿人的骨髓间充质干细胞后发现他们的细胞长的立体感很强，细胞也很细长，如下图
. X4 b9 T) ]1 J4 z8 u3 r& C. u: u/ V; _+ o' z
但是回来后因为我们没有他们的培养液，他们是杭州一家公司买的2000多一瓶的人类间充质干细胞条件培养液，是用血清替代物的，我还是用DMEM/F12培养基，只是胎牛血清换成了MSC FBS（澳洲产），换完液后细胞变的更细长，估计是开始的时候还没耐受环境的突然变化，之后细胞就开始变宽了。如下图，这才是换液后三天左右的时间，细胞就成这样了。。。
4 i4 k+ A' ]- `+ G$ k! H# M* F7 D" U

2 h; z( C: b0 ~  n  }  l  i, h之前拿回人的间充质干细胞时，那边老师确实也说换成DMEM类培养液的话细胞会变大变宽。我在想，如果我一开始有加入4ng/ml的b-FGF会好点么？
  P; f% ]; i3 Z  m, T2 H, z1 m还有就是有朋友在做大鼠的骨髓间充质干细胞的时候加b-FGF么？细胞是不是会因为b-FGF而比较细长？" \4 S' f9 x3 |& M" C; q

* q5 E9 S1 M7 L6 j其实简单的问就是如何让细胞形态更好，是哪种物质决定的？确实是b-FGF还是血清替代物还是其他什么的东西。。。谢谢哪位大侠解答下。。
2 t4 q5 ]' q- b6 U' L
/ n- u! z& r& K, [9 K# G5 O3 R! Y: [$ |
; r% C' B1 |9 v8 |

meister

首先你的图片细胞分别来源于人，大鼠，形态不同很正常。/ M- B$ Y( O5 U: M  f
另外每个批次的细胞形态会有区别。  b# t# @$ d( j& i6 q$ @) [+ m
胎牛血清很关键，要用进口的。: h$ @3 t0 y- d% I" T
bFGF是个维持干性的关键因子，有条件就使用。

cherrysung

同一楼上。加b－FGF后细胞形态和增殖能力都有明显提高，特别是进行后续实验时效果明显

天枰2012

细胞变宽可能是有点老化，加了因子应该会比较好，可以试着用进口血清会好点！

dimi_luki

回复 meister 的帖子+ w# o8 }- P9 d9 `3 T) ?) D
) B9 m# }4 u, x" w- D, B5 @3 B
血清是进口的，澳洲产的专门用于间充质干细胞培养的。。我看了很多文献，低糖的DMEM、alpha-DMEM、DMEM/F12等都有人用，另外就是胎牛，一般10~20%，所以本着节约成本的想法就没想着去添加其他因子。。。。

dimi_luki

回复 天枰2012 的帖子
! `( {. \3 ^$ }8 T: P( o+ V* S7 N3 g  W( E2 J4 F1 o  \/ `
还有个问题是如果细胞老化成团，传代时如何去除这些老化的细胞团呢。。。就是那种颜色较深，聚集程度比较高，胰酶消化也不太会散，肉眼就可以看见的小小那种的老化细胞团

xuning1106

我实验室用的是Gibico的F12/DMEN，澳洲特级血清，加BFGF，加G-MAX，生长的非常快（1:3传代，2天内覆盖率就达到95%以上），而且立体感很强，有条件可以试试，不是很贵

dimi_luki

回复 dimi_luki 的帖子
/ s! Y/ j( ^1 Y+ X) j; o
' F' ?9 k/ `% \% A9 }+ _b-FGF一开始还以为很贵呢。后来一算，10ug￥1100，全培养基里4ng/ml，可以配2500ml，还不错。。。但是这个G-MAX是什么？

dimi_luki

昨天hBMSCs传代后发现细胞又变细长了。。难道是之前那一代因为换了不同培养液的问题。。囧。。不过即使如此，立体感仍然没有之前用knock-out血清替代物的培养液的好。。。打算下次买好b-FGF后再去弄点hBMSCs来，做个对照看看。。

shizhu198511

回复 dimi_luki 的帖子
. q6 l; j$ |2 s" w- p1 Z; @( V1 k% {) m  e6 y. ^. V) W$ J% |; E
就是L-谷氨酰胺替代物，比它更稳定