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怎么样将出生后6天雄性小鼠的体细胞和生殖细胞分离？ [复制链接]

chenchunlei

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楼主
发表于 2012-5-30 11:49 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
干细胞之家微信公众号
      本人想将出生后6天的雄性小鼠睾丸消化成单细胞后，怎么样才能将体细胞和生殖细胞分离，并且想去鉴定一下分离得到的生殖细胞，如何去鉴定？
# U5 Y2 B, L, f+ f/ _   谢谢
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sj03572001

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沙发
发表于 2012-5-30 12:32 |只看该作者
可以通过THY1磁珠分选，或者先将分离的混合细胞铺于明胶上沉淀一晚，第二天将贴壁不牢靠的细胞（大部分为精原干细胞）轻轻吹起铺于饲养层上培养。
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chenchunlei

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藤椅
发表于 2012-5-30 14:44 |只看该作者
回复 sj03572001 的帖子
" K/ A3 J7 f3 _9 _$ q% S7 d. k" {3 {  [2 p
用10cm培养皿直接培养不行吗，那样体细胞会贴壁，生殖细胞悬浮吗？为什么还要铺琼脂呢？还有怎么去鉴定是精原干细胞啊？# v9 U/ c0 v0 L2 ]  C0 S
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sj03572001

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板凳
发表于 2012-5-30 19:29 |只看该作者
明胶有助于成纤维细胞贴壁，至于精原干细胞的鉴定，可以采用SSC的标志物通过免疫组化进行鉴定，标志物包括MVH, Cdh1 ，THY1， plzf， nanos2, Oct4, Stra8等
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POPOLD

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报纸
发表于 2012-5-31 17:10 |只看该作者
差速贴壁
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chenchunlei

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地板
发表于 2012-5-31 20:44 |只看该作者
回复 POPOLD 的帖子6 \2 s3 ]1 Q# P

" r9 L1 |3 S6 A什么叫差速贴壁啊？今天消化成单细胞之后培养了3个小时，结果大部分贴壁了。
( e# p3 T% W4 {培养液成分：DMEM 、a-MEM、 丙酮酸钠、PS、FBS
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490096812

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7楼
发表于 2012-6-8 14:43 |只看该作者
分离的话我们一般用差异贴壁，用多聚赖氨酸处理的。染色鉴定的话一般我们用thy1，plzf。分化的用c-kit
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ying

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8楼
发表于 2012-6-8 21:50 |只看该作者
又来一行家
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chenchunlei

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9楼
发表于 2012-6-9 22:32 |只看该作者
回复 490096812 的帖子. x7 S8 v7 U- P

6 f- L9 H. b9 ~8 `半小时贴壁后，用的vasa一抗做得组化，阳性率也就有百分之五十吧，是不是贴壁时间太短了啊
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490096812

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10楼
发表于 2012-6-10 15:56 |只看该作者
百分之50我觉得很高了 啊
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