求助原代大鼠骨髓间充质干细胞生长不均匀的问题

orchard

我培养的原代大鼠骨髓间充质干细胞已传至第二代，之前细胞状态一直都很好，这一次不知道是什么原因生长没有以前均匀了，有的地方很密集，细胞是长梭形，看起来状态不错；有的地方比较疏松，细胞看起来有点肥大。请教大家这是什么原因造成的呢？我现在是应该继续换液观察？还是原瓶打散？还是几瓶汇合？还是有什么更好的办法？
% O. c- O. `" d% c由于是第一次养原代细胞，缺乏经验，还望各位前辈多多指教，谢谢啦！

shizhu198511

原代生长肯定不均匀了，它是以集落生长的，有的地方就是密度大些，看情况如果细胞密度高的话，不要等长满，大概80%就直接传带了，穿戴以后细胞就均匀了

shizhu198511

原代生长肯定不均匀了，它是以集落生长的，有的地方就是密度大些，看情况如果细胞密度高的话，不要等长满，大概80%就直接传带了，穿戴以后细胞就均匀了

天枰2012

楼上说的很有道理，如果细胞数量多可以等到传代，如果少可以消化了重新接种，或者像你说的几瓶合种！

orchard

shizhu198511 发表于 2012-5-31 21:29 % a0 i) o) |: C! @3 \
原代生长肯定不均匀了，它是以集落生长的，有的地方就是密度大些，看情况如果细胞密度高的话，不要等长满， ...

, \" t- r/ T/ o% [6 E; @  P我之前已经传过两次了，请问大概到第几代的时候才会长均匀呢？是不是一定要生长均匀的细胞才能用于正式的实验？

orchard

回复 天枰2012 的帖子
  [+ _# V( r6 z: L$ a! a+ f( X
- _# ]: q( B% z2 p1 s请问你有过重新接种或者几瓶汇合的经验吗？我就担心细胞反复消化会影响它的性能

如来的观音

生长不均匀是因为传代后再次接种时候铺散不均，每次放入孵箱之前，水平小幅度晃动3次，垂直晃动3次，尽量保持培养皿的每个角落都铺上细胞，大鼠MSC总体呈梭形和扁平形两种状态，密度小时多数呈扁平状，密度大时呈梭形。

ontheway_hit

生长不均匀是因为你的培养瓶没有放水平吧，& l' x4 ^0 v% W0 P: V) b
你可以检查一下是不是培养箱里的板子不平，培养液往一个方向倾斜造成的，之前我们有过这样的例子。

ontheway_hit

原代长得很好，而第二代长得不好，我觉得肯定是你操作的原因，或者是上面说的培养瓶不平，或者是种细胞时没铺平。

shizhu198511

orchard 发表于 2012-6-1 10:03
0 ?* ^2 [- @% s, W6 K9 j" u我之前已经传过两次了，请问大概到第几代的时候才会长均匀呢？是不是一定要生长均匀的细胞才能用于正式的 ...

0 d3 \1 Z" n8 {- s% d原来你这算P3代了吧，可能你消化过程有问题吧，要先用PBS洗2次后再加胰酶消化，消化后要吹打均匀，最好是单细胞状态，然后装入培养瓶时最好前后，左右均要摇晃一下，一般不会不均匀呀