【请教】请问培养基配制时需要加谷氨酰胺吗？

zhenhuale

请教高手，培养基配制时需要加谷氨酰胺吗？如果需要加的量及间隔时间？

xinquan15

这个问题我请教过Gibco的专家，他们的回复是要看细胞是否需要，干细胞是需要添加的，免疫细胞就不一定了。另外如果需要添加的，而且是加的普通谷氨酰胺一般两周要重新加入原浓度的谷氨酰胺，目前有比较稳定的谷氨酰胺衍生物，可以用衍生物代替谷氨酰胺。

myboluo

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要加，在缺少谷氨酰胺时细胞会因生长不良而死亡（参考自司徒镇南《细胞培养》）。因为谷氨酰胺在4℃下放置7天即可分解约50%，买的很多干粉或配制好的培养基都是不加谷氨酰胺的，可以按1-10mmol/L终浓度加。之后每两周需要再补一次（现用现加）。# m8 H) C* I& u: }$ ?4 f
附上从丁香园某版主关于配制并分装100×谷氨酰胺溶液50ml的方法（网址：http://www.dxy.cn/bbs/thread/12957611#12957611）+ O8 p9 s. F7 s4 G& \; {2 c
1、称取谷氨酰胺1.4600g，加50ml三蒸水，摇动，搅拌溶解使固体充分溶解（约需10-20分钟）
5 Y+ i( s0 U! z. f2、吸入干净，干燥的50ml注射器中（挑选注射器时要注意针筒和活塞的匹配，不然太紧，吸入和吹出液体都很费劲，会增加很多麻烦），转入无菌间
1 k" K. I6 d7 `1 Y% R9 n3、于超净台内，打开一无菌的100ml血清瓶，无菌操作，取出一滤头，插在注射器张（配制谷氨酰胺专用，不得挪作他用），缓缓将滤过的液体注入血清瓶（约需5-10分钟）$ w! \" h" }4 B0 m) |' }, T
4、取1ml吸管，将谷氨酰胺分装入无菌试管（或1.5ml的EP管）中（每管1ml，可一次全部分装完毕（50管），拿出超净台，封口膜封口，2 i1 ~9 ]. g+ g( _
5、将分装好的谷氨酰胺放入-20度冰箱保存，注意不要将试管或EP管放倒，不要让液体浸到袋子上，最好让其直立，等溶液完全冻结后，再放倒保存。# m3 @4 R( R5 o0 S! R8 `* c
6、临用前，提前30分钟-1小时将一管（1ml）谷氨酰胺从冰箱取出放于室温化冻，（或者提前1-3小时充-20度取出，放于4度冰箱化冻），待谷氨酰胺全部融化后转入超净台，无菌操作，加入到培养基中，做好标签。
; e9 {+ w% A1 N' P7、配制时不要试图配制更大浓度的谷氨酰胺贮存液，因为此时溶解会有困难。

cherrysung

建议加，谷氨酰胺容易降解，终浓度一般在10mmol／l，配完培基后16天内用完

zhusealin

如果培养基里有谷氨酰胺，可以不加。如果谷氨酰胺对你的细胞很重要，可以在用之前补充一点

oucflora

个人认为如果你培养基中含有谷氨酰胺，就不用添加，但谷氨酰胺不太稳定，培养基配制后，可以-20度冻存保存，并在短期内用完；