如何获得人胚胎干细胞的倍增时间或生长曲线？

bigsnow55

看到很多文献，包括Nature or Science杂志里面经常有人胚胎干细胞的生长曲线或倍增时间，但都没有描述具体方法，好像获得这个太容易了，不值得一提。
) G, p# ]( K! J- A8 N但我目前遇到两个问题：
6 g0 u" x- ?+ [# ^2 B* f1. hES cells生长致密，不易消化成单细胞悬液，如果计数呢？
, o, L7 h+ U3 [) f6 V5 C8 D8 s2. 由于hES培养一般都需要MEF细胞（有些文章中也有MEF），计数时，两种细胞混在一起，该如何区分开呢？
0 Q+ {0 u5 @+ x& y# j- ]0 H请大家多指正！谢谢！

wwy551

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" y% _- S8 x7 O3 P1 f# @计数hESC的时候，先用Dispase消化，待ES克隆边缘卷起，将克隆吹打下来或者用1ML的移液管刮下来。这样可以尽量减少MEF掺进。计数的时候，排除体积较大的细胞，ES体积比MEF小很多。
  b7 y. U1 s. y+ {2 JhESC正常传代的时候一般用Dispase消化，这样得到的不是单细胞，若要得到单细胞，用胰酶消化，但是时间要比消化单层贴壁细胞久一点。这样也会导致一些细胞膜破碎，使得细胞聚集成团块。hESC计数跟单层贴壁细胞是不太一样，个人觉得计数结果不是很准。