为什么PlatE细胞转染后凋亡的这么严重？

sunshy2772

为什么Plat-E细胞转染后成这个样子了呢？以前还是好好的，最近几次都这样，头都大了，麻烦各位大侠给予解答，不胜感激哇~

shewawa

用的什么转染试剂啊？导入的是什么vector？这是转染后第几天的照片呢？7 r  }2 _; e) Z4 w
我用的plat-e转染长势良好，只有一次要放置不管，1星期以后看才发现死掉了很多细胞。$ C# p& k! |  c
据说有的转染方法细胞毒性比较强容易造成细胞死亡。

sunshy2772

回复 shewawa 的帖子8 P; E& u, t7 V* s

: e  S" ~0 T& q用的是脂质体2000,只转染GFP载体，36h就成这样子了，而且荧光很少，有没有可能是Plat-E细胞支原体污染呢？

shewawa

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! ^9 b% M" d" g$ i2 O) T5 h3 @# V2 m/ _, H$ N6 A9 e9 h
应该不是转染的问题了。同样的方法没出现过这样的现象。（但是我做的时候plat-e细胞密度相对高）5 G; _5 m1 b8 p
可能是plat-e细胞本身的问题了，有可能像你说的是细胞本身被污染了。passage时plat-e细胞没问题吗？要是没有会不会是转染试剂或者是是用的vector本身被污染了呢？  R7 U6 F3 N9 o8 q3 [' \6 a
等待高手解决吧。7 Q" ]! D) s- x* ?. ?

sunshy2772

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; {: Z' n$ K8 O7 G# f传代感觉细胞状态还可以，可是一转染就不行了

shewawa

回复 sunshy2772 的帖子* t) r2 X1 }  \, x6 R; c
, T2 Y) a; _! b0 t9 ?
听说plat-e传23代左右效果就不是很好了，是不是这个原因呢？Lipofectamine 2000 的细胞毒性并不是很强，应该不会引起细胞死。换下新的药品，重新提纯ＤＮＡ，外加请教试验技术员等。还是等待高高手来解决这个问题吧。

燕北飞

建议使用新的培液，都换成新的。很像是支原体污染！

zmm

转然后36h细胞应该不是这种状态，是不是质粒加入的量太多了，毒性较大，导致细胞死亡，脂质体推荐你用ltx