电转小鼠胚胎干细胞的参数设置？

lsjj619

电转小鼠胚胎干细胞的参数设置，Exponential decay以及time constant 也需要设置吗？要根据什么才能设置出比价理想的参数，使电转效率最高？

lsjj619

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8 f& i' y1 M% J' t. \7 [下载好了，不用发了，谢谢

lsjj619

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( y, T- f  l' S( H9 W$ R6 V5 k
里面有专用的小鼠胚胎干细胞的电转缓冲液吗？

lsjj619

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' Q6 y( A) G. I) [* |% A0 L- z2 I( y6 i) r9 y* O, b9 C' i
下载不了，请发一份给我，谢谢，邮箱lsjj619@126.com

echowdk

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; f# R: k. w: M& B* o# W* h' b/ z8 P+ f& S6 J+ X
据我的经验看，电转效率与ES细胞系的背景也有一定关系，当然这只是我的一个猜测。, B- z- ]8 c& T5 b; K: j. ~
反正我做过的两个不同细胞系电转效率就不同，具体效率的话我也没有估算过，但是一般做一次的话肯定会有几个阳性的，也够用了。

lsjj619

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9 [& e- y/ @( D' j  \1 b9 `# J7 w3 u; T! F
8 H& U1 u, v* G" N$ W, x你们电转的效率是多少？

echowdk

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$ C9 {% W8 D& h" t! @! f2 @
我们实验室用的是BIO-RAD的电转仪，电转介质就用1*PBS，每次电转用的ES细胞数是75万-100万个，电转后铺在10cm的Dish上。9 W$ B% M8 d4 K" a9 M8 [/ k  @9 ~2 n! N
电转杯用0.4cm的，750ul的细胞+50ul的DNA（共800ul液体）。室温电转，有的实验室在冰上。
% U$ s0 B& O: P电转参数设置：衰减波，电压250V，电容500uF，电阻100欧姆，然后还要设置一下电转杯的孔径大小4cm。

runsong

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http://www.stemcell8.cn/thread-37899-1-1.html
+ Y  r5 @" `) k, Z7 I* \" q第一页

runsong

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0 R  w& H4 ?( y1 N6 i/ j) I7 O4 O; y6 e
我的液体是自配的，等下我给你发个链接，你载一下。电转这东西我也说不清，只能拼人品。电转液里要加25%的opti-mem

lsjj619

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) ?. u/ a& ?  e* C  t( l& O
) b/ x& m- ^9 A4 ?用的Bio-rad 电转仪的CE module，400V，100um,3次，1秒间隔，6孔板养的小鼠干细胞，电转效率很低啊都不到1%，细胞死亡数也多，请问你转的是什么细胞，电转效率这么高啊-30%?电转缓冲液也是Bio-rad的