为什么插入片段后，细菌的培养温度变化了？

miRNA

RT，一般pCDNA3.0载体插入大部分的目的基因后，转化后都是在37°中培养，
7 P! c4 ?3 P" ?为什么插入有的目的基因后，转化后却需要在25°中培养才能长出来？$ P6 Q  y0 T! ?3 {. W* U, E

miRNA

hello? anyone there?

linzi214

我们实验室没有用过这个载体，但是其他载体pGl3-basic、pBabe-puro、pBabe-Neo、U6等载体在插入目的片段后扩增条件不变。插入的目的片段大吗，有什么特殊功能吗？一般来说应该不会影响培养条件吧

miRNA

  t: {. a6 ], a) g0 b) r& j! x% v( _" P6 y; b8 H
回复 linzi214 的帖子9 d- W- f+ j( ]+ ~8 E
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所以啊，这就是有意思的地方，插入片段不大，只有3kb，只要是插入成功的，都必须是在25度才能长出来，而只要是37度长出来的，必然是没有插入成功的空载体，所以，我想问一下各位谁碰到过这种情况；
2 J# T9 \1 J6 ~% g* j  h, a按理说，在DH5a中根本就没有目的蛋白的表达，只是一段核苷酸序列而已，怎么就会和温度联系起来的呢？

linzi214

你的插入子表达的蛋白有什么特殊功能吗？有调节温度的作用吗？还真的是第一次听说插入子调节细菌生存温度的。

miRNA

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3 r7 y. z- ~6 g) n+ \' |5 @- P, T1 |0 U
插入的目的基因的功能是一种与矿化有关的蛋白，没有调节温度的作用啊...
. L: }( `0 t0 l我觉得很有意思，就是不知道该怎么研究，0 b7 k8 t9 W# Q
我觉得，这应该与表达的蛋白没有关系吧，
* h5 @. j" m; S/ `0 S3 C$ [' P+ w# I毕竟对于大肠杆菌来说，只是有一段异物核酸的进入而已啊,
" \) z$ D2 J  Y/ r' h不懂...

lxm5668

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  w' J' O# K7 l9 j+ N/ }+ K) Q3 h( _1 V% f! o. N
您的这个问题挺有意思的，值得探讨一下。9 {- y, {# M, ~
以前培养细菌纯化某种蛋白时，为了避免包涵体的形成我们就降低温度，常规的，在25度的条件下培养，这样会减少包涵体的形成，能够得到多一些的目的蛋白。我想您的这种目的基因表达的蛋白是否也是与包涵体有关。

lxm5668

您说的在25度和37度下，目的基因表达与否是检测的蛋白水平还是基因水平，如果是蛋白水平的话很可能与包涵体有关。

youzi821

lxm5668 发表于 2012-6-30 08:35 9 |$ r2 q6 G# T  {; x! V
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9 b; q# z& v5 L3 @- |" w* p4 s0 U5 }9 Y
您的这个问题挺有意思的，值得探讨一下。

: b+ N7 V) S& Q6 k一般情况下，确实没有楼主说的那种情况，但是我认为这位战友说这种情况可能性比较大，你插入的是什么基因？

youzi821

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/ X9 q' g$ J4 o9 z/ m" H7 V. p3 h
( [  P# Y5 h( |6 z3 D一般25度~28度是多数蛋白的诱导温度，你这个基因是否是温度敏感的？