小鼠胚胎干细胞在滋养层上的形态特点?附图，请鉴别是否为干细胞

lsjj619

! g" C: g) v6 a4 j/ E& }+ _& C( [
7 `1 i. f- n) a4 }1 F; J3 P如题
! z, G5 o' z% g/ S4 p1 x, U& ]" S" o, b5 N

! V0 k5 `; v& K- U$ Z6 |3 I( a/ L( P
# U7 p5 D0 w$ U6 E9 w2 W7 L9 t( d$ q2 D8 U! E/ T/ s0 ~
9 G' L6 K3 b: G
本来是订购了Life公司的Knockout血清替代培养基的，但是被海关卡住了，只能自己配制了。下面是我的配方，有没有要改进的呢？怎样才能把干细胞培养好呢？$ `& B" G) O) A( t7 v; g  `

$ R+ z# V- {- ?  K; F  p                        储存浓度            工作浓度                   体积 ' @. F9 Y+ ]1 I( p
FBS                      100%               15%                       7.5 ml
+ [. m9 O! k$ mNEAA                     100X               1X                        0.5ml
9 |, l" T9 w+ KPyr                       100X               1X                        0.5ml
% |0 f9 A, I1 h6 v9 U双抗P+S                  10,000unit          100unit                    0.5ml  w& U* v8 k0 f% V
2-mercaptoechanol          55mM             0.1mM                     90ul
# d6 {$ W% U' o/ t7 V" nLIF                       106 unit/ml          1000unit/ml                 50ul  i" ?4 k9 L4 @2 k0 j7 z
DMEM（High-Glu）补足至50ml。% Y; c1 Z8 H, B0 d# c

lsjj619

因为不支持图片的格式，所以只能附件上传了，希望高手们能多停留2分钟帮忙看一下

yuhaoze

8 R4 l  z6 h. t/ o, v7 R5 ~+ k& T' ~

1 g* K' U/ C5 }: {2 B' ]! V照的不清楚啊  养在哪里，有什么照的相？  n2 u6 H2 t0 q& Y
是不是饲养层细胞图，这个你自己有数，饲养层有没有长满消化成团往下掉？要是没有的话，那些土豆就不是饲养层细胞

lsjj619

回复 yuhaoze 的帖子
: q2 S% N% F$ R  h7 Q$ O2 G5 ^% X" d' w
养在6-well plate里面啊，一消化，细胞全部都掉下来了，用奥林巴斯的倒置荧光显微镜

lsjj619

回复 yuhaoze 的帖子5 C* a$ K0 {# `6 T$ ^: }9 k6 q" {( {
: M5 z& m. R) e# I9 o$ Y
饲养层细胞是挺密的，几乎全铺满板了

yuhaoze

六孔板绝对能拍清楚，选中间的光圈，拿出你最大的功力拍张图啊！
; E: j) X5 G1 `( N# m' G2 `9 Q- ]feeder太密了，我昨天铺了一个。2x10E4/cm2 觉得还可以，计个数再接，这样实验有平行性，找愿意比较方便，别让它张的太满了~

zlqamy

上面的两张图放大倍数太小了，看不清啊。下面的应该不是干细胞

yuanyan2010

第一张和第二长上面很多干细胞，第二张图标指示的是干细胞，应该不是feeder，下面三张应该是没消化好的feeder团块吧，不是干细胞。

zpzp0312

第一第二张图片的可用

lsjj619

回复 yuanyan2010 的帖子! C! p9 E, v2 n9 n' x
/ V% T0 l( m# o, U6 g5 ]7 b
那前两张的干细胞还是正常未分化的吗？别人养的好的，干细胞团是紧密的球状的，我的这个真的是吗？