淋巴细胞的转染困扰

风雪叶杰

请问各位高手，淋巴细胞需要怎样才能转得进去啊？因为我想用淋巴细胞EL4做双荧光报告分析，所以感觉使用病毒有点不现实，包装luciferase和renilla就很大了，但电转的条件实验室又还没有建立，使用lipo2000按照说明书试了一次，转染效率很低，大概只有0.01%，这个问题该如何解决啊？先谢过了

chips100

目前还是电转和病毒靠谱些，脂质体很难了，有个办法可以试试，lipo转染过夜，然后换液，将换了液保存，新鲜培养液养个一天，然后再换上保存的液再转一次，这个办法听过没试过，能够提高一些，但还是有限。

风雪叶杰

谢谢，这个方法估计也难。我试过使用lipo转染GFP 24和48小时的，不换液。细胞死的不多，可是照荧光还是只有几个点。哎，电转的条件难摸啊

chips100

那用病毒呗，效率杠杠的。曾经lipo转一个细胞20%，换了腺病毒90%以上，绿油油的一片。& h/ q. h- `/ `8 l' S+ V5 s# ]: t- `
5 i. B( ]" N0 a; Y; L
不过最近想用一下电转。不是有预定程序的吗？

卡门

淋巴细胞的转染本身就比较难，要多摸摸条件。电转的话效率会高一些，但死亡率多很多。

细胞海洋

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; r" f0 V7 V* V3 s  L' r你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样- U: W) g* f3 a. M7 o( z6 A' t& v. A# c
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否则他会看不到

风雪叶杰

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6 L- `4 [( z( Y( _$ z' E哦，知道了，谢谢

风雪叶杰

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- O: L. x) a) ?! |5 x: L程序换了电转仪以及不同的细胞估计都得变，我们实验室做了hela细胞摸条件，结果比lipo转染效率还差，被老板P了一顿后就不了了之

chips100

需要细胞特异的转染液，Lonza有介绍，价格6800。我看了一下几乎所有种类的细胞转染率都能到50%左右。原来有个师姐电转过神经干，说能到10%。

风雪叶杰

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) `! H8 j8 g9 Y哥们，你的建议确实很好。这个我也问过了，然后一问代理商说要6000多我就直接秒杀了这个念头，提都懒得跟老板提了。哎，小硕没地位啊