请教大牛有人做过猪的BMP15启动子吗？请不吝赐教啊！ - 干细胞随笔干细胞之家

干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 › 干细胞之家论坛 › 干细胞随笔 › 请教大牛有人做过猪的BMP15启动子吗？请不吝赐教啊！



免疫细胞治疗专区	欢迎关注干细胞微信公众号

返回列表

查看: 51033\|回复: 5	go 请教大牛有人做过猪的BMP15启动子吗？请不吝赐教啊！ [复制链接]

qmm0303@163.com

新手上路

Rank: 1

积分: 34
威望: 34
包包: 473

楼主

发表于 2012-6-15 08:17 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

本帖最后由细胞海洋于 2012-6-15 09:19 编辑

有人做过猪的BMP15启动子吗？请不吝赐教啊！

回复引用

Rank: 8 Rank: 8

积分: 306
威望: 306
包包: 3648

小小研究员

沙发

发表于 2012-6-15 09:19 |只看该作者

详细说一下你的问题吧

回复引用

举报返回顶部

weiyepan

高级会员

Rank: 4

积分: 1903
威望: 1903
包包: 6126

金话筒优秀会员

藤椅

发表于 2012-6-16 01:32 |只看该作者

你是有启动子做不出转录还是启动子弄不到啊?

已有 1 人评分	威望	包包	收起理由
细胞海洋	+ 1	+ 5	欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 1 包包 + 5 查看全部评分

回复引用

举报返回顶部

qmm0303@163.com

新手上路

Rank: 1

积分: 34
威望: 34
包包: 473

板凳

发表于 2012-8-24 11:52 |只看该作者

回复 weiyepan 的帖子

1、猪的BMP15基因启动子序列是BMP15基因起始密码子ATG前的区域码？我找了ATG前 2000多bp的区域，在线预测启动子核心元件却没有，不知道是什么问题。3 D0 D5 m8 ^; Z- W# I+ {; b: ]
2、引物设计的酶切位点和防止移码的碱基该怎样添加？有点头大。

已有 1 人评分	威望	包包	收起理由
细胞海洋	+ 2	+ 10	欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 2 包包 + 10 查看全部评分

回复引用

举报返回顶部

weiyepan

高级会员

Rank: 4

积分: 1903
威望: 1903
包包: 6126

金话筒优秀会员

报纸

发表于 2012-8-24 21:49 |只看该作者

1. 是的，一般启动子集中在900~1500左右的区域，但也有在很上游调控的例子。不过在线的启动子预测一般是根据现有的数据库做的，单一个数据库做出来的结果不一定准确，你要先找对物种和Pol才能比较准确的预测出来。
2. 启动子一般比较难扩增，主要是区域内部GC分布不均匀。我们设计是从ATG前的序列开始，往3'端1500bp左右，主要看Tm不要看长度，一对引物要比较平衡，温度差最好不要超过5度。剩下的酶切位点就往5'端加就行了，加上去的序列不用算Tm值。如果想提高成功率，可以往外设计nest引物，特异性也会高很多，Tm的选择也会丰富很多。另外，PCR的时候加入DMSO和Betain，会增加产量。