如何提取卵母细胞

spy529

用透明质酸酶消化完颗粒细胞后，如何清洗卵母细胞？具体方法

星移龙一

不知楼主问的是什么物种的卵母细胞。我们这做的是猪的，先用移液器将消化过的卵母细胞在T2（TCM199+2%FBS）液中洗三遍（即做三个液滴，从一个移入另一个为洗一遍），再用移卵针将卵母细胞在T2液中洗两遍。

spy529

小鼠的，但我们需要大量提取，一次大概得五、六百个卵呢，每次都一个一个的挑出来？用离心机清洗可行吗?

hcluo

小鼠，用PMSG和hCG进行超排处理，然后收集输卵管壶腹部膨大处的卵丘细胞，最后用透明质酸酶进行消化处理，在解剖纤维镜下，可以挑选出纯净的卵母细胞。不过，获取不同时期的卵母细胞需要不同的处理方式。

肖特

需要排卵前的还是排卵后的？
' }0 d  n, j3 W5 s
1 |( u: C# K& p9 }" ~3 C8 e针刺卵巢可以取排卵前的卵母细胞，再根据直径区分不同时期。+ S! m0 |- G3 r8 C  N
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收集卵母细胞置于液滴中，在解剖镜下用毛细移卵针吸取干净的卵母细胞，转移到其他液滴中。只取裸露的卵母细胞的话需要轻吹以去掉颗粒细胞。0 T1 g6 n7 g" y" p; X  D
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卵母细胞较大，离心会离破，在液滴中卵母细胞很容易沉降。2 O* t1 f' c- Q/ A% w: m

' y% E; [9 I% M* a熟练的话会操作快点。

wxl87

回复 肖特 的帖子) F, w0 K7 O( R, ^! i
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这是小鼠的卵母细胞，怎么用针刺法？卵巢很小的。

肖特

9 t' K# ~: E+ ^& ]

% v* F; b4 ^: c0 Q回复 wxl87 的帖子9 p6 N* |& e+ O( I0 v

* K7 h  c! D% o  Q: C0 N小鼠超排之后取完整卵巢，解剖镜下针刺比较明显的卵泡，卵丘卵母细胞复合体会释放出来

wxl87

回复 肖特 的帖子
# D; _: h0 y' Q2 I1 x& k4 c! K3 ~# `- z9 Z4 G
这个每次大概能取到多少个卵母细胞？

spy529

小鼠的一个卵巢少的可以取十几个多的有时可达三十个
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肖特

回复 wxl87 的帖子) W) k% ~  {; n) ~

2 ]* e8 Z3 W( G, d# S超排冲输卵管每只小鼠可以取20-50或者更多个排卵后的卵母细胞。
3 r& X0 N1 l' q; n9 \超排针刺每个卵巢可以取50个左右，所以每只小鼠可以取100个左右。+ b5 U# {' E% ^+ p: ?
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针刺后暴露出的如果是裸卵，大多是正在闭锁的卵泡中的卵母细胞，所以这种卵母细胞状态会不太好。) B" R: f& t- T0 ]3 ^7 T% Z7 G
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需要卵母细胞数量较多的话就多用几只小鼠。
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