如何提取卵母细胞

spy529

用透明质酸酶消化完颗粒细胞后，如何清洗卵母细胞？具体方法

星移龙一

不知楼主问的是什么物种的卵母细胞。我们这做的是猪的，先用移液器将消化过的卵母细胞在T2（TCM199+2%FBS）液中洗三遍（即做三个液滴，从一个移入另一个为洗一遍），再用移卵针将卵母细胞在T2液中洗两遍。

spy529

小鼠的，但我们需要大量提取，一次大概得五、六百个卵呢，每次都一个一个的挑出来？用离心机清洗可行吗?

hcluo

小鼠，用PMSG和hCG进行超排处理，然后收集输卵管壶腹部膨大处的卵丘细胞，最后用透明质酸酶进行消化处理，在解剖纤维镜下，可以挑选出纯净的卵母细胞。不过，获取不同时期的卵母细胞需要不同的处理方式。

肖特

需要排卵前的还是排卵后的？6 h$ U/ r1 Y) ^6 _. M; ~; e7 ~
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针刺卵巢可以取排卵前的卵母细胞，再根据直径区分不同时期。1 |: T1 W% j3 S; t
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收集卵母细胞置于液滴中，在解剖镜下用毛细移卵针吸取干净的卵母细胞，转移到其他液滴中。只取裸露的卵母细胞的话需要轻吹以去掉颗粒细胞。" ~. s4 O* V4 [, Q1 H+ G

( c: ?3 S8 x2 w4 b+ v# l) P  [卵母细胞较大，离心会离破，在液滴中卵母细胞很容易沉降。
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7 f( L2 _/ \2 M6 |9 B' @5 p5 O% v熟练的话会操作快点。

wxl87

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; Z2 S$ Y5 W3 V8 d) u这是小鼠的卵母细胞，怎么用针刺法？卵巢很小的。

肖特

2 Q+ m8 C+ e/ A$ }( s2 b" @( C) O( z8 i) A' W5 Y; W: |
回复 wxl87 的帖子0 @" C* l9 _0 y: Q' H

! u, ^: A2 k; N) a小鼠超排之后取完整卵巢，解剖镜下针刺比较明显的卵泡，卵丘卵母细胞复合体会释放出来

wxl87

回复 肖特 的帖子& a) f% t( ^2 ~

6 x$ Z& w( B; V) _7 {' R这个每次大概能取到多少个卵母细胞？

spy529

小鼠的一个卵巢少的可以取十几个多的有时可达三十个1 t$ n3 W* ]) ?' m/ D9 a+ I/ \

肖特

回复 wxl87 的帖子% S0 f, c) N/ C
! X& Q+ T7 i! ?( x+ B0 H) I5 Z' x
超排冲输卵管每只小鼠可以取20-50或者更多个排卵后的卵母细胞。
6 R, ?/ o; F; K# A4 x' B超排针刺每个卵巢可以取50个左右，所以每只小鼠可以取100个左右。8 Z# F) y+ e+ X% b( u
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针刺后暴露出的如果是裸卵，大多是正在闭锁的卵泡中的卵母细胞，所以这种卵母细胞状态会不太好。  q# s, Y6 T- |' s* o! \  n# \
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需要卵母细胞数量较多的话就多用几只小鼠。
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