如何提取卵母细胞

moluxingke

如果是大量收集卵母细胞，可参考08年的这篇science，PTEN和卵泡发育相关的一篇文献；
3 B2 |6 H5 Q& C6 l$ O9 w' Z  p2 W大致方法如下：卵母细胞分离方法：
6 }8 o+ @0 y; `0 o5 ~; ^1 小鼠脱颈处死，取出卵巢，在显微镜下剔除脂肪垫和多余组织。9 l+ K+ _& R- H& y0 B
2 将卵巢剪碎，然后胶原酶消化，消化过程中不断吹打振动。
' l, p0 |" R3 V  胶原酶溶于DMEM/F12培养基中，浓度为0.05%，培养基添加0.4%（g/ml）的BSA，100U/ml的青霉素和100ug/ml的链霉素，
/ @$ X0 o; n2 D$ V( C7 J3 大约40-60min以后，待组织消化基本完全，往消化液中加入EDTA至终浓度为40mM，然后于37℃孵育15-20min，期间不时搅拌，直到颗粒细胞以及其他细胞类型完全散开。
4 }, d1 f6 ~! D+ @! H0 }: t4 将细胞混合液洗涤一次，然后于上述不加血清的DMEM/F12培养基中培养12h，使颗粒细胞和其他细胞贴壁生长，未贴壁的卵母细胞和血细胞被聚集到上清液中，室温1000rpm离心5min，然后血红细胞经过低渗buffer出去，（含144mM NH4Cl和17Mm Tris-HCl Ph=7.2）。& n! b3 n+ I5 O
5 洗涤几遍以后，离心收集卵母细胞，加入裂解液裂解后，14 000rpm 离心20min，4℃，取上清测BCA法蛋白浓度，待用。
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0 G" {0 W0 d6 f# p- T        具体方法参见：   Pradeep Reddy, et al.  Science，20089 O* Q& S, @2 r- B. C5 B/ c