脐带间充质贴壁法和酶消化法比较

meister

大家有做过比较的吗， share一下。, |/ Q0 M0 H8 R- S
个人认为贴壁法效率低、时间长、污染率高。

xuzhijuan1989

回复 pailishi 的帖子% [* i" m- ~( C) Y5 h
0 Z* U, @# C4 ^7 ]) P7 {
你好，酶解法要怎么做比较好呢？

yanmin

个人觉得贴壁法对细胞损伤小，虽然时间有点长，但细胞较纯，酶消化法有时候消化的不完全，细胞出的少

brian111

回复 liucong 的帖子0 y1 L% y5 ^: p
6 o: G# W& A: J* b6 k8 w
不好意思好久不上。。我们都是买的商品培养基

回到从前

都做过，酶消化法和贴块各有各的利弊，消化法得到的细胞快，时间短，成本高。贴块法时间长，得到的细胞不一定是P0，纯度高，成本低，主要看血清怎么样，如果好的话细胞都不错 ，但是每一批次的血清差别很大，细胞影响的因素很多，一段时间好 一段时间形态不好

fm001982

感谢分享，受益良多。

zjjwiner

+ O8 |0 A8 C$ _, V
& v" g7 w  R: U& Q回复 taoqilh 的帖子1 ^# k4 X' p3 r3 A- S0 ]. q. G: ^

$ K" P  a) s" d8 P8 ^, S: Y我做的是SD大鼠的脐带间充质干细胞的培养。用的时组织贴壁法，同样遇到了你所说的情况，请问你是怎么样解决的？能交流一下吗？

taoqilh

' L, n, Q" N5 E; m: Q# N. j8 p6 U$ D. @/ o" H
我做过相关的实验，比较了在猪脐带间充质干细胞中各种酶的消化作用和贴壁法的效果，分享如下：
5 k# f0 h5 e3 R编号        处理方法                                  细胞出现时间         数量         形态
9 D$ B, @* d1 J7 ~$ ]1        胶原酶Ⅳ（4h）+0.25%胰酶(15min)            7d                            少        成纤维样
% B. i( O0 u* Y6 M9 q2 v2        胶原酶Ⅳ+0.25%胰酶(1h)                           10d                         较少    成纤维样
, y# E8 `, w/ X9 P, v1 z, [2 O3        胶原酶Ⅳ，30 min                                             17 d                          很少        成纤维样
' l* m/ R' x+ i* ^, Q: R2 u4        胶原酶Ⅰ+透明质酸酶(1h)                             4d                             多        成纤维样
: w; G% t" }; L在4法中，已经可以得到种类均一，形态良好的猪脐带间充质干细胞，但由于酶的消化作用对细胞可能产生不良的影响，因此，使用胶质贴壁法（去血管和外层包膜），以观察是否能得到更好的猪脐带间充质干细胞。
5 u1 t/ C. i% M& C4 r6 n) q! a7 _! e实验结果表明，通过胶质贴壁得到的细胞，在接种3-6d后，可看到围绕贴壁胶质组织生长的成纤维样细胞，形态均一，增殖速度较快，在形态上与胶质消化法得到的细胞无差异，但整体细胞量比胶质消化法少，待细胞生长到可传代的密度时，可见少量细胞形态发生变化，立体感下降有老化迹象，同时消化时间延长，传代接种后死细胞的量也相对较多。
# p3 P8 f* P  ?3 {/ J  B以上是我自己实验的结果，仅代表个人意见，呵呵
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huajie881026

个人感觉组织块贴壁法较好，虽然时间长，细胞爬出时间长短不一，但细胞形态及细胞数量其实还可以的。一般10天左右可以看到形态不错的细胞，14天去除组织块，然后每三天换液，至28天传代，以后每14天传一次代，时间的确比较漫长。- q# A7 t7 ~4 g# B+ T, s+ ?9 h
酶消化法我也试过，无论是单用胰酶，单用胶原酶，还是联合用，获得的细胞都不多，不知是我操作方式有问题还是这种方法本身的问题。。。

溜圆

胶原酶到底用哪种比较好呢？看到各种都有人在用。