脐带间充质贴壁法和酶消化法比较

meister

大家有做过比较的吗， share一下。
0 t0 l( M" n. O/ e7 k( C个人认为贴壁法效率低、时间长、污染率高。

pailishi

酶消化法要很多，我们这里做了详细的对照试验了的，不管是成本还是产率等等个方面

pailishi

酶消化法要好很多

zhangy259

据我的经验，胶原酶和胰酶结合法，即酶消化法产率高，而组织贴壁法虽然对细胞损伤很小，但是爬出的细胞的速度慢。至于污染问题，我觉得没有区别。

brian111

我没做过比较，但是觉得机械法的纯度很高。73,105，90的阳性率能到98%以上。我觉得酶消化法可能对细胞有伤害，毕竟是化学物质。我的一个同事，他在msc上做了很多实验，说机械法比酶消化法要好。但其实我认为不管什么方法，都是次要的，主要是培养基。如果培养基好，哪个方法都能培养出好的细胞，可能会有些区别，但是影响不大。但是培养基不好的话，怎么分离都没用。

大少爷

贴壁法

glysh

brian111 发表于 2012-6-26 13:02
! R: C6 d% Z2 ~' G+ p我没做过比较，但是觉得机械法的纯度很高。73,105，90的阳性率能到98%以上。我觉得酶消化法可能对细胞有伤害 ...

1 v- `" Y3 I, c7 ]请教是怎样的机械法？另外，请问各位大侠，有没有用灌注法培养MSC的？

xinquan15

我们当时采取酶消化法和贴壁法，消化法用的胶原酶二和四及与胰酶联合法都试过，但因为一直不理想最后采取的贴壁法，贴壁法一般10-15天才会爬出细胞，确实存在时间长的弊端，但是传到P2后，生长是很快的，一根脐带到了P5以后可以传175瓶200瓶左右。流式测表面标志也是很不错的，73,105，90的阳性率也可以达到98%以上。% s' T% q" h7 ]
机械法相对简单，脐带反复冲洗后，去掉三根血管和表面的白膜层，钝性剥离华通氏胶，剪成1-2立方毫米小片，少量培养基侵润，均匀贴于贴壁瓶底部倒置，2-3小时翻瓶，补充培养基，每三天换液，到P0爬出，之后消化传代。' |! x) A. h) J" G9 x! E' _' N; A/ X
灌注法只在文献上看过，没有实际操作过。

meister

自己顶一下

sdwzg119

酶消化法得到的细胞不纯，较杂，生长速度也没有贴壁法快