脐带间充质贴壁法和酶消化法比较

taoqilh

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8 ]% c7 T8 K9 r$ c8 z7 G我做过相关的实验，比较了在猪脐带间充质干细胞中各种酶的消化作用和贴壁法的效果，分享如下：1 c) O/ J3 x! J
编号        处理方法                                  细胞出现时间         数量         形态. r- X$ ?6 X6 @( l# W
1        胶原酶Ⅳ（4h）+0.25%胰酶(15min)            7d                            少        成纤维样
) ~4 h% n' A2 Q9 H1 S8 p) |) n2        胶原酶Ⅳ+0.25%胰酶(1h)                           10d                         较少    成纤维样
* a9 A4 w+ \) H) f) f3        胶原酶Ⅳ，30 min                                             17 d                          很少        成纤维样
7 m# h+ l2 T3 R* X& K2 t4        胶原酶Ⅰ+透明质酸酶(1h)                             4d                             多        成纤维样4 [) y+ O: g' A
在4法中，已经可以得到种类均一，形态良好的猪脐带间充质干细胞，但由于酶的消化作用对细胞可能产生不良的影响，因此，使用胶质贴壁法（去血管和外层包膜），以观察是否能得到更好的猪脐带间充质干细胞。/ k: y& X% Q/ D5 U8 @8 a* Q/ ~
实验结果表明，通过胶质贴壁得到的细胞，在接种3-6d后，可看到围绕贴壁胶质组织生长的成纤维样细胞，形态均一，增殖速度较快，在形态上与胶质消化法得到的细胞无差异，但整体细胞量比胶质消化法少，待细胞生长到可传代的密度时，可见少量细胞形态发生变化，立体感下降有老化迹象，同时消化时间延长，传代接种后死细胞的量也相对较多。3 {; X4 I" w2 m2 i* P1 J4 h6 x
以上是我自己实验的结果，仅代表个人意见，呵呵' V3 n. X! G3 C# Z

zjjwiner

0 k& V. H: p0 s) M3 I3 t# |' y: x/ k" ?* D& J
回复 taoqilh 的帖子; R- G5 S9 _; u: ~

: Q/ m7 t, X1 Q7 }$ }8 H& r我做的是SD大鼠的脐带间充质干细胞的培养。用的时组织贴壁法，同样遇到了你所说的情况，请问你是怎么样解决的？能交流一下吗？

fm001982

感谢分享，受益良多。

回到从前

都做过，酶消化法和贴块各有各的利弊，消化法得到的细胞快，时间短，成本高。贴块法时间长，得到的细胞不一定是P0，纯度高，成本低，主要看血清怎么样，如果好的话细胞都不错 ，但是每一批次的血清差别很大，细胞影响的因素很多，一段时间好 一段时间形态不好

brian111

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不好意思好久不上。。我们都是买的商品培养基

yanmin

个人觉得贴壁法对细胞损伤小，虽然时间有点长，但细胞较纯，酶消化法有时候消化的不完全，细胞出的少

xuzhijuan1989

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你好，酶解法要怎么做比较好呢？