小鼠ES细胞胰酶消化传代问题

narajie

最近在样小鼠ES细胞，第一次6孔板消化的时候消化2min，feeder就在上清液了，去上清后，es细胞是粘在一起一整块的，后来听说ips胰酶消化应该是feeder一整块下来，细胞还贴在皿上，请问这是因为细胞类型不一样吗？但是我直接就这么吹散传代了，传完后也没什么问题...接着第二次传代发现feeder消化了5min+都没下来，10min都还没下来，但是加进液体吹下feeder连同es细胞一起下来了，请问各位有谁知道这是什么原因吗？平常大家养小鼠es用胰酶传代的时候是feeder消化下来还是es消化下来，消化时间大概多久？怎么处理的？....目前非常困惑，跪谢！！！(对了，第二次的时候细胞有出现过污染，但是我加了双抗后也没什么大问题又继续养了，这个应该没影响吧...)

narajie

回复 amberma 的帖子# K. C2 ^! w4 h; X9 s7 G0 X: C
8 T- U* g0 y$ I1 x  a4 \, k
哦哦，明白！谢谢！

narajie

回复 amberma 的帖子7 `* B0 @0 Y, A

" N! o- \6 H7 }3 N6 x哦哦，明白！谢谢！

narajie

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( ?1 T7 P: M+ p- Y4 C& }6 R( q& V7 R$ y
哦哦，明白！谢谢！

amberma

回复 narajie 的帖子
: q% D+ P9 \1 \: [8 q5 J6 q% L4 M: F' C6 D
铺好明胶，放置培养箱至少15min。
' U+ A# ?2 q! f8 I将消化离心好的细胞用干细胞完全培养基重悬，铺于明胶，20-30min镜下观察，待feeder细胞贴壁，吸取悬浮细胞。5 i, L% b. R' K  \
重复上述操作，再差速贴壁一次~

zmm

回复 narajie 的帖子7 b- e2 F3 h0 K0 d/ ~+ E

6 A* x% t) o7 T9 F/ \# j基本可以，但也要看情况。大概是个10-20mim左右的时间。

narajie

回复 YYQ6301 的帖子
8 n/ f9 j# N9 J0 w/ [6 c$ X, z' Y
- v9 D& F) [. N' T3 ^哦哦，谢谢。

YYQ6301

2 B& ?& |- T$ O* @% @

7 d! N- V1 E2 |# X2 z, }部分MEF已经能贴上了啊   一般我会处理20-30分钟，看情况而定

narajie

回复 YYQ6301 的帖子
1 P$ L* g7 ]3 v9 r$ k6 ^$ B+ L
, F4 {  _% B/ O10min就能贴上壁了？

narajie

回复 zmm 的帖子0 Y3 g2 E2 ~. G3 \8 [: d8 \

2 z; Q, G3 H/ b9 P/ {7 _5 L5 J- q: K这么快就能贴壁了吗？