trizol提取

luoziwei

RNA用trizol提，在用异丙醇沉淀的时候，是不是可以用酒精代替？多少量？紧急。

weiyepan

有机溶剂沉淀都是用脱水的原理处理核酸使其沉淀，异丙醇的脱水效果比乙醇要好，对小分子的RNA来说更加是这样。! d( G: t  {* P) x$ l7 U8 T) X0 c: B
不知道楼主提的总RNA还是小分子RNA。如果总RNA的话用乙醇可以，但乙醇比例至少要到66%以上；如果提的是小分子RNA，建议就不要用乙醇了，回收效果不好。6 i4 }* ]1 j, a6 w* c& v
另外回应一下沉淀的时候加盐的原理，为的是形成核酸的盐沉淀，光是核酸的话很难沉下来的，除非是在等电点附近。加不同的盐有不同的效果，铵离子不能随便加的，对很多后续反应都有抑制作用，和染料更是容易形成复合物改变波长，因此一般都是加钠盐和钾盐。

linzi214

用异丙醇沉淀不是标准的RNA沉淀方法吗？实验室如果暂时没有的话，可以找别人借一点好了，样本珍贵以前有没有做过预实验的话，尽量不要更换其他试剂和方法了

ielisa

使用异丙醇的话是等体积异丙醇，室温下10min即可，如果你想用乙醇的话，要2倍体积，最好-20℃，30min

huangcong1988

个人觉得楼主没必要纠结这个问题，用异丙醇是trizol提取RNA的关键步骤，沉淀RNA用异丙醇就行，干嘛要换成无水乙醇呢？

avbn

大家方法都挺多的吗，不过有人做过验证吗，有没有差别呢

luoziwei

回复 chentian820 的帖子+ u$ w3 ]# o: g( r- U
" C! I2 B& b: O# X" C
请问，加醋酸铵的作用是什么？可不可以加冰醋酸和氨水一起？

luoziwei

回复 yaolinzhang 的帖子, @! `$ d8 ^8 P

. Q) G2 v, @7 f$ s8 ]我也用等体积的，沉淀了之后，还用75%的酒精洗了一遍，咋还有230nm的吸收峰呢？

chentian820

3倍体积无水乙醇再加十分之一体积的醋酸铵

youzi821

注意无RNA酶操作环境