质粒转染

bjshan

我现在准备做质粒转染实验，在看实验方法时，了解到对不同的细胞format，试剂用量不同。Format有96-well，24-well，12-well等等不同的类型，我是刚刚接触这类的实验，所以想请教各位解释一下这里的Well和Format的意思。还有在转染之前准备细胞的过程中，一定要使细胞大于90% confluent，这个confluent又是指的什么啊？在转染细胞的过程中，还有什么其他应该注意的地方，希望你们不吝赐教。

birdflubirdflu

回复 bjshan 的帖子; I2 ]4 W2 L7 b6 x2 G% i

9 F2 c$ B8 V+ H) J+ `3 Ywell就是孔的意思啊96，24,12，就是孔板的数目。confluent是指一个板或孔里细胞的覆盖率。转染时培养基不能加抗。还有很多细节，楼主最好自己多找点资料啊。新手上路，还是得勤奋啊~！

bjshan

回复 birdflubirdflu 的帖子
2 |6 N* u* q7 q& m
% t0 w0 |8 O( f% x1 G多谢解答。在进行转染时，细胞覆盖率怎样确定呢？

birdflubirdflu

回复 bjshan 的帖子
3 r  p5 ]' ]( n: t4 @% _: ]2 b5 v8 w* j7 j* u, h' y
肉眼观察即可啊~！ 就是看到细胞数目大约覆盖了90%空间的平板

bjshan

回复 birdflubirdflu 的帖子
5 q) r5 ^: \! Y# m; _6 ?
, [1 f$ H3 d9 X& F/ H多谢。

巴黎没有摩天轮

转染效率对细胞密度很敏感，转染时细胞密度越高，转染效率、表达效率越高，并且可降低细胞毒性。所以一般贴壁的细胞，前一天铺皿，第二天密度达90%以上时转染；悬浮细胞，中板后随即转染。

五仁

回复 birdflubirdflu 的帖子! A. B2 F7 U# R. w" n+ o2 K" n

+ a1 g3 m+ ?7 M6 r# Q& ]6 N这个confluent，如果说成覆盖率不准确，应该理解成细胞之间的汇合率吧。

sfnana

96-well，24-well，12-well就是96孔板 24孔板 12孔板。confluent细胞汇合的程度。这个肉眼观察根据你的经验判断就行。转染之前还是要仔细看一下说明书，不同的转染试剂，对细胞汇合度的要求是不一样的，还有要确定转染前是否需要除去血清等细节。祝你转染成功。