质粒转染

bjshan

我现在准备做质粒转染实验，在看实验方法时，了解到对不同的细胞format，试剂用量不同。Format有96-well，24-well，12-well等等不同的类型，我是刚刚接触这类的实验，所以想请教各位解释一下这里的Well和Format的意思。还有在转染之前准备细胞的过程中，一定要使细胞大于90% confluent，这个confluent又是指的什么啊？在转染细胞的过程中，还有什么其他应该注意的地方，希望你们不吝赐教。

birdflubirdflu

回复 bjshan 的帖子$ Y4 w+ X5 k! w
+ i( v: f- d3 H
well就是孔的意思啊96，24,12，就是孔板的数目。confluent是指一个板或孔里细胞的覆盖率。转染时培养基不能加抗。还有很多细节，楼主最好自己多找点资料啊。新手上路，还是得勤奋啊~！

bjshan

回复 birdflubirdflu 的帖子. u3 J  D# b; u$ ?8 a
: J4 }2 p3 |' j. f; `# T6 a
多谢解答。在进行转染时，细胞覆盖率怎样确定呢？

birdflubirdflu

回复 bjshan 的帖子- L1 J  k; }0 ?1 l: J+ |

4 B& @3 g. ^( Q6 E( k' I! N1 H肉眼观察即可啊~！ 就是看到细胞数目大约覆盖了90%空间的平板

bjshan

回复 birdflubirdflu 的帖子
; E( D3 q' |% I0 F. E- N" m+ B
多谢。

巴黎没有摩天轮

转染效率对细胞密度很敏感，转染时细胞密度越高，转染效率、表达效率越高，并且可降低细胞毒性。所以一般贴壁的细胞，前一天铺皿，第二天密度达90%以上时转染；悬浮细胞，中板后随即转染。

五仁

回复 birdflubirdflu 的帖子' M& r9 z2 S8 j. K

5 [( G: O3 v( a2 r- t这个confluent，如果说成覆盖率不准确，应该理解成细胞之间的汇合率吧。

sfnana

96-well，24-well，12-well就是96孔板 24孔板 12孔板。confluent细胞汇合的程度。这个肉眼观察根据你的经验判断就行。转染之前还是要仔细看一下说明书，不同的转染试剂，对细胞汇合度的要求是不一样的，还有要确定转染前是否需要除去血清等细节。祝你转染成功。